SELDI-TOF-MS技術(shù)對(duì)肝癌裸鼠移植瘤模型體內(nèi)微量蛋白譜分析.pdf

1、 目的：采用Bel-7402人肝癌細(xì)胞懸液接種于3周齡BALB/C裸鼠的左肩背部皮下,構(gòu)建人肝癌裸鼠移植瘤模型,觀察腫瘤大小與生長(zhǎng)時(shí)間的相關(guān)性,利用SELDI-TOF-MS技術(shù)對(duì)造模成功后不同時(shí)段的裸鼠體內(nèi)差異蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),分析這些微量蛋白的表達(dá)規(guī)律,旨在尋找新的原發(fā)性肝癌早期診斷標(biāo)志物。方法：將Bel-7402人肝癌細(xì)胞復(fù)蘇,傳代培養(yǎng)3-5次后選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞配置成濃度為1×107個(gè)/ml的癌細(xì)胞懸液,皮下接種于3組實(shí)驗(yàn)組裸

2、鼠左肩背部,劑量為0.1ml/只,對(duì)照組裸鼠左肩背部皮下接種相同劑量無(wú)血清培養(yǎng)基。密切觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)情況,每?jī)芍軠y(cè)量并記錄裸鼠腫塊的體積。所有裸鼠均采用摘眼球取血法,對(duì)照組和3 組實(shí)驗(yàn)組分別在造模成功后 20d、40d、60d 取血 0.5ml/只,然后處死裸鼠,并分離腫瘤組織送病理科進(jìn)行組織切片檢查。裸鼠血液標(biāo)本應(yīng)立即于4℃離心5 min,轉(zhuǎn)速為3000 rpm,分離樣本血清并分裝編號(hào),凍存于-80℃?zhèn)溆?。?yīng)用 SELDI-T

3、OF-MS 技術(shù)檢測(cè)分析裸鼠血清標(biāo)本中的微量蛋白,利用 Ciphergen ProteinChip 3.0 和 Ciphergen Biomaker Wizard 3.1 軟件對(duì)得到的蛋白質(zhì)譜圖進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和分析,篩選出與肝癌相關(guān)的差異表達(dá)蛋白,并在蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索比對(duì)。結(jié)果：裸鼠接種癌細(xì)胞懸液 15-20天長(zhǎng)出腫塊,成瘤率 100%。分析篩選出與肝癌相關(guān)并呈規(guī)律性變化的差異表達(dá)蛋白(P<0.01)5個(gè),相對(duì)分子質(zhì)量分別為2016D

4、a、3309Da、3442Da、3745Da、2747Da,其中前四種微量蛋白在實(shí)驗(yàn)組裸鼠體內(nèi)表達(dá)逐漸增強(qiáng),最后一種微量蛋白在實(shí)驗(yàn)組裸鼠體內(nèi)表達(dá)逐漸減弱。在 Swiss-Prot 蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)這 5 組微量蛋白進(jìn)行檢索和鑒定,初步結(jié)果為 Protein 2A、Potassium channel toxin alpha-KTx 20.1、Serine protease inhibitor 2、Neurotoxin P2和LeuA lea