約氏瘧原蟲來源MIF同源分子對小鼠免疫系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)的探索.pdf

1、瘧疾是世界上最嚴重的傳染性疾病之一，2010年全球感染瘧疾的人數(shù)仍達2.16億，死亡人數(shù)約為65萬。瘧疾的肆虐不僅威脅疫區(qū)人群的健康和生存質(zhì)量，也給這些地區(qū)的發(fā)展中國家?guī)砭薮蟮慕?jīng)濟損失和社會壓力。在人類抗擊瘧疾的戰(zhàn)斗中，對瘧原蟲生物學(xué)特性的了解無疑是一個至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。瘧疾與其他大多數(shù)感染性疾病一樣，需要通過免疫效應(yīng)機制對其控制和消除，瘧原蟲免疫抑制導(dǎo)致免疫逃逸和過強的炎癥反應(yīng)引起腦瘧等免疫病理損傷是這一疾病的突出特征。但目前對于瘧原

2、蟲如何調(diào)節(jié)宿主免疫系統(tǒng)的機制知之甚少。
　　 哺乳動物巨噬細胞遷移抑制因子（MigrationInhibitoryFactor，MIF）是一種具有多種生物學(xué)活性的細胞因子，與許多感染性疾病和免疫相關(guān)疾病相關(guān)，且在瘧疾感染病理、特別是瘧疾感染導(dǎo)致的貧血中發(fā)揮了重要作用。目前已有四種瘧原蟲來源MIF(PlasmodiumderivedMIF，pMIF)分子被報道：P.falciparumMIF(PfMIF)，P.bergheiMIF

3、(PbMIF)，P.vivaxMIF(PvMIF)和P.yoeliiMIF(PyMIF)。pMIF被證明與宿主MIF在高級結(jié)構(gòu)和功能上有驚人的一致性?，F(xiàn)在已有多個研究小組在探索pMIF分子的功能，體外實驗證明宿主巨噬細胞是其靶細胞，提示這些蟲源MIF分子能夠調(diào)節(jié)宿主免疫細胞。但是pMIF對機體詳細的免疫調(diào)節(jié)機理還沒有明確結(jié)論。本論文通過體外實驗和體內(nèi)實驗兩部分探索約氏瘧原蟲PyMIF重組蛋白在宿主免疫系統(tǒng)可能的調(diào)節(jié)靶點。
　　

4、作為能夠激活初始T細胞的抗原遞呈細胞，在瘧疾抗感染免疫過程中發(fā)揮了很重要的作用。本實驗室前期做了大量工作探索pMIF對DC的功能影響，發(fā)現(xiàn)PyMIF可下調(diào)DC表面TLR4分子表達，且誘導(dǎo)與DC共孵育后CD8+T細胞的CD69表達下降。本論文在此基礎(chǔ)上，繼續(xù)探索了PyMIF對骨髓來源BM-DC、CD4+T細胞和全脾細胞的作用。在體外實驗中，未發(fā)現(xiàn)PyMIF可以影響B(tài)M-DC分泌IL-10;經(jīng)PyMIF作用后的BM-DC與CD4+T細胞共培

5、養(yǎng)，未見T細胞表面CD69分子表達和IL-2分泌有改變：未發(fā)現(xiàn)其可以直接調(diào)節(jié)CD4+T細胞活化：PyMIF作用后未見CD4+T細胞CD69表達和IL-2分泌有改變；未發(fā)現(xiàn)其可以調(diào)節(jié)全脾細胞向Th1或調(diào)節(jié)性T細胞分化。因此，我們認為在本研究中，PyMIF重組蛋白在體外對宿主的骨髓來源樹突狀細胞分泌IL-10功能、CD4+T細胞活化和脾細胞的分化過程沒有直接調(diào)節(jié)作用。
　　 我們進一步探索了PyMIF在體內(nèi)的功能。為了更好地模擬體內(nèi)

6、的感染環(huán)境，分別用約氏瘧致死株P(guān).yoelii17XL和非致死株P(guān).yoelii17XNL分別感染易感BALB/c小鼠或抗性DBA/2小鼠，建立了四種小鼠感染模型。在感染早期或晚期經(jīng)尾靜脈注射PyMIF重組蛋白，結(jié)果顯示PyMIF能降低四種感染情況下的蟲血率，但在不同感染模型中PyMIF對免疫細胞活性的調(diào)節(jié)并不相同：約氏瘧致死株感染BALB/c小鼠后，PyMIF能夠下調(diào)髓系DC細胞和漿樣DC細胞的比例，并上調(diào)CD4+T細胞中T-bet+

7、IFN-γ+雙陽細胞的比例；約氏瘧致死株感染DBA/2小鼠后，PyMIF能夠下調(diào)巨噬細胞比例；而在非致死株感染BALB/c或DBA/2模型中，均未引起所檢測指標(biāo)的改變。尾靜脈注射PyMIF后，四種感染模型脾細胞體外培養(yǎng)上清中IFN-γ有上調(diào)趨勢。除此之外，用PyMIF基因敲除的致死性蟲株感染易感型小鼠BALB/c后，發(fā)現(xiàn)在基因敲除蟲株感染的小鼠中蟲血率比在野生型蟲株感染小鼠中高。并且血清中IFN-γ水平低于對照組。以上工作比較深入地探索