熱消融聯(lián)合消融灶周邊注射CpG ODN抑制小鼠肝癌生長.pdf

1、目的:
　　探討熱消融聯(lián)合消融灶周邊注射CpG ODN治療對小鼠肝癌的治療效果，以及繼發(fā)抗腫瘤的免疫效應(yīng)。
　　方法:
　　建立Hepa1-6小鼠皮下肝癌模型，待腫瘤長徑生長至6-10mm時隨機分為四組:
　　(1)聯(lián)合治療組:皮下腫瘤用100℃生理鹽水消融治療，消融后第10min和第7天先后2次在消融灶周圍多點注射1mg/ml的CpG ODN溶液0.1ml;
　　(2)消融治療組:皮下腫瘤用100℃生理鹽

2、水消融治療，消融后第10min和第7天先后2次在消融灶周圍多點注射生理鹽水0.1ml;
　　(3)CpG ODN治療組:小鼠皮下腫瘤周圍多點注射1mg/ml的CpG ODN溶液0.1ml，第7天時再次在腫瘤周圍多點注射1mg/ml的CpG ODN溶液0.1ml;
　　(4)對照組，不予任何治療。
　　檢測指標(biāo):
　　(1)各組隨機選取8只。
　?、僭谥委熀?5天內(nèi)測量腫瘤體積，計算抑瘤率。
　?、谌缓?/p>

3、繼續(xù)觀察45天，計算各組小鼠死亡率和中位生存時間。
　　(2)各組隨機選取8只小鼠在消融治療后第24小時處死，免疫組化技術(shù)檢測病灶內(nèi)HSP70表達，計算各組HSP70標(biāo)記指數(shù)。
　　(3)各組隨機選取8只小鼠在消融治療后第15天時處死小鼠，取腫瘤病灶切片。
　?、貶E染色計算腫瘤殘留率。
　?、诿庖呓M化檢測消融病灶內(nèi)CD4+T細胞及CD8+T細胞的數(shù)量。
　　(4)另外選取一批小鼠，按上述4組進行治療，選取

4、消融治療30天后各組仍有存活的小鼠，每組8只，對側(cè)腋下接種等量腫瘤細胞，觀察再接種腫瘤細胞的成瘤率。
　　結(jié)果:
　　(1)腫瘤體積變化及抑瘤率:治療后第15天，聯(lián)合治療組小鼠腫瘤縮小140.94mm3，熱消融組小鼠腫瘤縮小44.42mm3，CpGODN治療組小鼠腫瘤縮小87.68mm3，對照組小鼠腫瘤增大1263.94mm3，各實驗組小鼠與對照組相比，腫瘤體積顯著縮小(P＜0.05)，聯(lián)合治療組腫瘤縮小更顯著，但聯(lián)合治療組

5、與熱消融組及CpGODN治療組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。抑瘤率:聯(lián)合治療組，98.43％，消融治療組，91.05％，CpG ODN治療組，96.64％，均顯著高于對照組。聯(lián)合治療組抑瘤率較熱消融組及CpG ODN治療組更高。
　　(2)死亡率:各組死亡率分別為:聯(lián)合治療組12.5％(1/8)，對照組為87.5％(7/8)，CpG ODN治療組及熱消融治療組為37.5％(3/8)，各實驗組小鼠觀察期內(nèi)死亡率均低于對照組(P＜0.05)

6、，聯(lián)合治療組與熱消融組及CpG ODN治療組相比，小鼠死亡率較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(3)HSP70標(biāo)記指數(shù):聯(lián)合治療組（22.07±2.64）％，熱消融組（16.37±2.03）％，CpG ODN治療組(10.74±3.60)％，對照組（4.25±1.84）％;各實驗組與對照組相比有更多HSP70表達(P＜0.05)，聯(lián)合治療組HSP70表達最多，與熱消融組及CpG ODN治療組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜

7、0.05)。
　　(4)腫瘤殘留率:聯(lián)合治療組為12.5％(1/8)，熱消融治療組為25％(2/8)，CpG ODN治療組為87.5％(7/8)，對照組為100％(8/8)，聯(lián)合治療組與熱消融治療組相比，無明顯差異，但聯(lián)合治療組與CpG ODN治療組相比，差異顯著(p＜0.05)，熱消融治療組與CpG ODN治療組相比，亦有顯著差異(p＜0.05)。
　　(5)腫瘤灶內(nèi)CD4+T、CD8+T數(shù)量檢測。
　?、貱D4+T

8、細胞:聯(lián)合治療組，52.75±4.15;消融治療組，26.00±1.79;CpG ODN治療，34.13±1.67;對照組，12.25±1.03。各實驗組較對照組有較多CD4+T淋巴細胞浸潤(P＜0.05)，聯(lián)合治療組與熱消融組及CpG ODN治療組相比，差異顯著(P＜0.05)。
　?、贑D8+T細胞:聯(lián)合治療組，10.50±1.17;熱消融治療組，9.50±1.87;CpG ODN治療組，13.63±1.12;對照組，10.6

9、3±1.3，各實驗組中CD8+T細胞與對照組相比，無顯著差異(P＞0.05)，實驗組間比較亦無顯著差異(P＞0.05)。
　　③CD4+T/CD8+T:聯(lián)合治療組，5.02;熱消融治療組，2.74;CpG ODN治療組，2.51;對照組，1.15。各實驗組CD4+T/CD8+T比值較對照組均有增加，差異顯著(P＜0.05)，聯(lián)合治療組與熱消融組及CpG ODN治療組相比，差異顯著(P＜0.05)。
　　(6)再接種腫瘤成瘤率

10、:聯(lián)合治療組為12.5％(1/8)，熱消融治療組為37.5％(3/8)，CpG ODN治療組為37.5％(3/8)，對照組為100％(8/8)，各實驗組小鼠對側(cè)接種腫瘤成瘤率與對照組相比，差異顯著(p＜0.05)，聯(lián)合治療組顯著低于熱消融組及CpG ODN治療組(p＜0.05)，但熱消融組與CpG ODN治療組相比，無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1.小鼠皮下肝癌組織周邊注射CpG ODN能在一定程度上局部增強免疫效應(yīng)。