2E8-NCTD免疫毒素的研制及其體內(nèi)外靶向殺傷研究.pdf

1、Y1056416洳；j唼碩士學(xué)位論文⑨~A文題fI2壁S：盥￡!壁壘焦盎盂盟盟劍壟甚堡立鹽墊魚垂笪盟置作肯姓名————圭亙衛(wèi)L———————一指導(dǎo)教師———』壹垂墾L立絲壘———一所在’#院———』塑趕翌——————一浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文見報(bào)道。、ZCH42E8(簡(jiǎn)稱2E8)是本實(shí)驗(yàn)室自行研制并經(jīng)國際鑒定私命名的新的抗人CDl9單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，本研究采用ZCH4—2E$(簡(jiǎn)稱2E8細(xì)胞)分泌的單克隆抗體(單抗)作為研究材料，將去

2、甲斑螫素和CDl9單克隆抗體通過活潑酯法連接起來，制成免疫毒素，并研究其在體外的殺傷作用和體內(nèi)對(duì)白血病動(dòng)物模型的作用，為其進(jìn)一步進(jìn)入臨床試驗(yàn)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，具有十分重要的意義。材料與方法l、常規(guī)方法復(fù)蘇和培養(yǎng)ZCH42E8雜交瘤細(xì)胞和Nalm6細(xì)胞；采用改良Bouvet法純化IgM型2F8單抗；SDSPAGE鑒定單抗純度；研究不同濃度的去甲斑蝥素對(duì)Nalm6細(xì)胞的殺傷作用。2、2E8NCTD免疫毒素的研制：先合成活潑酯，再將活潑酯和抗體

3、反應(yīng)制備免疫毒素。將相同量的單抗和不同量的活潑酯反應(yīng)制各免疫毒素(命名為1T3系列)，流式測(cè)定IT3系列對(duì)CDl9抗原的識(shí)別能力，24孔板上測(cè)定IT3系列免疫毒素對(duì)01105個(gè)Nalm6細(xì)胞的殺傷作用，確定抗體和活潑酯的最佳連接比。3、體外測(cè)定免疫毒索的靶向殺傷作用；先檢測(cè)Nalm6細(xì)胞和K562細(xì)胞上CDl9抗原位點(diǎn)的表達(dá)情況；再將合成的免疫毒素命名為IT9。1)分別作用于Nahn6細(xì)胞和K562細(xì)胞，每孔O5x105個(gè)細(xì)胞，總體積2

4、mL，比較lOug／mL2E8抗體、46pg，rnL去甲斑蝥素NCTD、10gtg／mE免疫毒索2ESNCTD對(duì)兩種細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；24孔板上比較15pg／mL、10ug，mL、5pg／mL、25ugJmL、125Ⅱg／mE、0625u∥mE免疫毒素(IT9一1)對(duì)2Xl∥個(gè)Nalm6細(xì)胞的作用。4、建立急性白血病動(dòng)物模型；連續(xù)2天腹腔注射環(huán)磷酰胺，24h后尾靜脈注射Naim6細(xì)胞5x10個(gè)／只，觀察小鼠癥狀，記錄發(fā)病日期，病理檢查小鼠