臍帶來源間充質干細胞對脊柱關節(jié)炎患者受累關節(jié)局部白介素-23-Th17軸的抑制作用.pdf

1、第一部分，白介素-23/Th17軸在脊柱關節(jié)炎患者受累關節(jié)局部的異常表達
　　背景及目的:白介素-23(IL-23)是IL-12細胞因子家族的一個新的成員,主要由天然免疫細胞分泌。目前有研究報道HLA-B27誘發(fā)未折疊蛋白反應,上調IL-23的表達。IL-23與IL-23R結合,促進Th17細胞的產生。IL-23/Th17軸參與多種慢性炎性疾病的發(fā)生,如銀屑病、炎性腸病等。本研究通過評估IL-23/Th17軸在脊柱關節(jié)炎(SpA)

2、患者受累關節(jié)局部的表達,驗證IL-23/Th17軸在SpA中的致病作用。
　　方法:(1)選取2012年9月至2013年1月中國人民解放軍總醫(yī)院風濕科門診接受關節(jié)腔穿刺抽液及注射藥物治療的SpA及膝骨關節(jié)炎(OA)患者;(2)無菌條件下抽取關節(jié)液,以密度梯度離心法分離關節(jié)液單個核細胞(SFMCs);(3)利用流式分選技術分選出CD14+單核細胞,在LPS(100ng/ml)刺激下體外培養(yǎng)24h;(4)SFMCs在PHA(1μg/m

3、l)刺激下體外培養(yǎng)72h;(5)細胞內染色及流式細胞儀檢測CD14+IL-23+及CD3+CD4+IL-17+(Th17)細胞比例,采用FlowJo軟件分析流式數據;(6)應用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析。兩個樣本之間的比較采用Mann-Whitneyu檢驗或t檢驗;計數資料的比較采用Fisher確切概率法;相關分析采用Spearman秩相關分析法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:(1)共納入22例SpA患者,男

4、性19例,女性3例,HLA-B27陽性16例,陰性6例,年齡20~45(32.4±8.4)歲;病程5~96月,中位數病程27.0(6.8,60.0)月;6例OA患者,男性2例,女性4例,HLA-B27均為陰性,年齡46~67(58.3±7.9)歲;病程18~120月,中位數病程43.0(22.5,75.0)月;(2)SpA患者關節(jié)液CD14+IL-23+細胞比例為1.49％(1.18,1.87),Th17細胞比例為4.15%(3.15,

5、5.63),均分別高于OA患者關節(jié)液中CD14+IL-23+細胞比例[0.68%(0.48,1.11)]及Th17細胞比例[1.11%(0.81,1.69)],兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);(3)HLA-B27陽性SpA患者關節(jié)液CD14+IL-23+細胞比例為1.60%(1.24,2.11),HLA-B27陰性SpA患者關節(jié)液中CD14+IL-23+細胞比例為1.26%(0.88,1.59),兩組比較差異無統(tǒng)計學意義(P

6、>0.05);(4)SpA患者關節(jié)液CD14+IL-23+細胞比例與Th17細胞比例呈正相關關系(r=0.67,P<0.01);但二者與患者的病程、ESR、CRP、BASDAI、BASFI、BASMI及VAS均無相關性。
　　結論:SpA患者關節(jié)液中表達IL-23的單核細胞及Th17細胞較OA患者明顯增多,且二者之間存在正相關關系,提示IL-23/Th17軸在SpA中具有致病作用。
　　第二部分，臍帶來源間充質干細胞對脊柱關

7、節(jié)炎患者受累關節(jié)局部白介素-23/Th17軸的體外抑制作用
　　背景及目的:間充質干細胞(MSCs)是存在于正常人體多種組織中具有多向分化潛力的非造血干細胞,同時具有強大的抗炎及免疫調節(jié)作用。近年MSCs已在多種慢性炎性及自身免疫性疾病的治療中顯示了一定的療效及安全性。SpA是一組以天然免疫反應為驅動的慢性炎性疾病,近年研究顯示IL-23/Th17軸在SpA的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。本研究通過觀察臍帶來源MSCs(UCMSCs)對Sp

8、A患者受累關節(jié)局部IL-23/Th17軸的抑制作用,為UCMSCs應用于SpA的臨床治療提供理論依據。
　　方法:(1)選取2012年9月至2013年1月中國人民解放軍總醫(yī)院風濕科門診接受關節(jié)腔穿刺抽液及注射藥物治療的SpA患者;(2)無菌條件下抽取關節(jié)液,以密度梯度離心法分離SFMCs;(3)利用流式分選技術將SFMCs分為CD14+單核細胞和去CD14+-SFMCs兩部分;(4)SFMCs貼壁分選出單核細胞,與UCMSCs在L

9、PS(100ng/ml)刺激下共培養(yǎng)4h,利用流式分選技術分選出CD14+單核細胞,即CD14+單核細胞(UCMSCs預處理);(5)CD14+單核細胞在LPS(100ng/ml)刺激下單獨培養(yǎng)或與UCMSCs共培養(yǎng)24h,細胞內染色和流式細胞儀檢測CD14+IL-23+細胞比例,ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清IL-23的濃度;(6)去CD14+-SFMCs在PHA(1μg/ml)刺激下單獨培養(yǎng),或分別與CD14+單核細胞(未處理)或CD1

10、4+單核細胞(UCMSCs預處理)共培養(yǎng)72h,細胞內染色和流式細胞儀檢測Th17細胞比例;(7)在CD14+單核細胞存在或缺席下,去CD14+-SFMCs單獨培養(yǎng)或與UCMSCs共培養(yǎng)72h,細胞內染色和流式細胞儀檢測Th17細胞比例;(8)應用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析;采用Wilcoxonsignedrank檢驗進行兩個配對樣本之間的比較,采用Friedman檢驗進行多個相關樣本比較;以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

11、>　　結果:(1)共納入9例SpA患者,男性7例,女性2例,HLA-B27陽性8例,陰性1例,年齡21~44(31.1±8.3)歲;病程6~96(39.7±31.9)月;(2)SpA患者關節(jié)液CD14+單核細胞體外培養(yǎng)(LPS,100ng/ml)24h,CD14+IL-23+細胞比例為1.55%(1.32,2.61);UCMSCs與CD14+單核細胞直接接觸共培養(yǎng),CD14+IL-23+細胞比例下降至1.06%(0.80,1.81),兩

12、組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);CD14+單核細胞單獨培養(yǎng),上清中IL-23濃度為205.6pg/ml(182.8,256.7),與UCMSCs共培養(yǎng),上清中IL-23濃度為121.1pg/ml(111.1,195.0),兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);(3)去CD14+-SFMCs在PHA(1μg/ml)刺激下體外培養(yǎng)72h,Th17細胞比例為0.86%(0.22,0.94);培養(yǎng)體系中加入CD14+單核細胞(未

13、處理),Th17細胞比例升至2.71%(0.65,3.31);加入CD14+單核細胞(UCMSCs預處理),Th17細胞比例2.26%(0.40,2.66),三組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);(4)去CD14+-SFMCs在PHA(1μg/ml)刺激下單獨培養(yǎng)72h,Th17細胞比例為2.71%(1.80,3.05),UCMSCs共培養(yǎng)使Th17細胞比例降至1.59%(1.20,2.67),兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.

14、01);CD14+單核細胞(未處理)與去CD14+-SFMCs混合后培養(yǎng)72h,Th17細胞比例為3.10%(2.81,5.49),UCMSCs共培養(yǎng)使Th17細胞比例降至2.20%(1.52,2.95),兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);在CD14+單核細胞(未處理)存在下,UCMSCs對Th17的抑制率由18.0%(11.6,32.5)升至40.3%(25.8,51.6),兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。