人臍帶間充質干細胞微泡對膠原誘導關節(jié)炎大鼠體內趨化因子表達的影響.pdf

1、類風濕關節(jié)炎（Rheumatoid arthritis,RA)是一種高度致殘性自身免疫性疾病，臨床特征為對稱性多關節(jié)炎，病理改變?yōu)榛ぱ?、軟骨及骨的破壞。趨化因子誘導的炎癥細胞浸潤是RA滑膜炎形成和持續(xù)存在的原因，是引起滑膜增生，血管翳形成，軟骨和骨破壞的前提。近年研究發(fā)現(xiàn)間充質干細胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）具有免疫調節(jié)作用，可抑制RA患者體內炎性趨化因子的表達。間充質干細胞來源的胞外囊泡（Mesenc

2、hymal stem cells derived extracellular vesicles,MSC-MVs）是MSCs產(chǎn)生的異質性膜分泌體，目前已證實微泡能模擬其母體細胞的免疫調節(jié)作用，有可能成為RA治療的新手段。
　　目的：
　　觀察hUCMSC-MVs靜脈注射對CIA大鼠干預療效；探討hUCMSCs-MVs對CIA大鼠血清及滑膜中趨化因子MCP-1、IP-10、SDF-1表達的影響，從趨化因子角度闡明hUCMSCs-

3、MVs治療RA作用機制。
　　方法：
　　1.體外分離、培養(yǎng)人hUCMSCs，差速離心法分離hUCMSCs-MVs，用透射電子顯微鏡觀察MVs形態(tài)、大小。
　　2.建立CIA模型：飼養(yǎng)Wistar大鼠，弗氏完全佐劑加II型膠原乳液2次免疫動物，觀察大鼠癥狀（大體觀、關節(jié)炎指數(shù)、雙足腫脹度）、病理評估，建立CIA模型。
　　3.實驗分組：造模成功的CIA大鼠隨機分為CIA組、MTX組、hUCMSCs組、hUCMSC

4、s-MVs低濃度組、hUCMSCs-MVs中濃度組、hUCMSCs-MVs高濃度組，同時設立正常對照組，每組6只。
　　4.給藥方法：加強免疫后第二天進行干預。hUCMSCs組大鼠尾靜脈注射數(shù)量為2×106個hUCMSCs/Kg/鼠，hUCMSCs-MVs低、中、高濃度組大鼠靜脈注射MVs量分別為為30μg/100μl/鼠、60μg/100μl/鼠、90μg/100μl/鼠，MTX組腹腔注射0.9mg/kg，每周1次，共3周。

5、r>　　5.療效及檢測指標：分別測量CIA大鼠體重、雙足腫脹度、關節(jié)炎指數(shù)觀察hUCMSCs-MVs是否改善CIA大鼠關節(jié)炎癥；用高通量流式多因子檢測技術測定各組大鼠血清中MCP-1、IP-10水平，應用ELISA測定各組大鼠血清中SDF-1水平，應用免疫組化技術檢測踝關節(jié)滑膜中趨化因子MCP-1、IP-10、SDF-1表達，收集數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　結果：
　　1.hUCMSC-MVs干預對CIA大鼠一般情況的影響：

6、r>　　（1）hUCMSC-MVs鑒定:經(jīng)透射電子顯微鏡觀察,hUCMSC-MVs為一類直徑介于30nm-200nm之間大小不一的囊泡狀結構，蛋白質濃度約為2.05μg/μl，符合目前國際公認的鑒定hUCMSCs-MVs的標準。
　　（2）hUCMSC-MVs干預對CIA大鼠體重影響：與正常對照組相比，CIA大鼠體重增長程度明顯降低（P<0.05），干預后CIA大鼠體重增長程度較前改善，42d時， hUCMSC-MVs高濃度組大鼠

7、體重較CIA組明顯升高，有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　（3）hUCMSC-MVs干預對CIA大鼠關節(jié)癥狀影響:CIA組大鼠較正常對照組足腫脹度明顯升高（P<0.05），AI明顯升高（P<0.05），干預后CIA大鼠關節(jié)腫脹度減輕，AI下降，42d時，CIA組較MTX組足腫脹度、AI較明顯升高（P均<0.05）， CIA組與hUCMSCs組、hUCMSC-MVs各組（低、中、高濃度）足腫脹度、AI相近（P均>0.05）。

8、>　?。?）hUCMSC-MVs對CIA大鼠踝關節(jié)病理的影響:正常對照組大鼠關節(jié)腔結構清晰，無或少量滑膜增生及炎性細胞浸潤；CIA模型組大鼠滑膜增生明顯，大量炎性細胞浸潤，部分出現(xiàn)軟骨破壞。MTX組、hUCMSCs組、hUCMSC-MVs低、中、高濃度組滑膜增生及炎性細胞浸潤明顯減少，且高濃度組優(yōu)于hUCMSCs及MTX組。
　　2.hUCMSC-MVs干預對CIA大鼠血清及滑膜中趨化因子水平的影響：
　?。?）hUCMSC

9、-MVs對CIA大鼠血清中趨化水平影響：CIA組血清MCP-1、SDF-1水平較正常對照組均明顯升高（P<0.05）；CIA組血清MCP-1、SDF-1水平較MTX組明顯升高（P<0.05）；CIA組血清MCP-1、SDF-1水平較hUCMSCs組明顯升高（P<0.05）；CIA組分別與hUCMSC-MVs低、中、高濃度組比較，CIA組血清MCP-1、SDF-1水平明顯升高（P<0.05）；MTX組分別與hUCMSC-MVs低、中、高濃

10、度組比較，各組血清MCP-1、SDF-1水平相當(p均>0.05)，hUCMSC-MVs低、中、高濃度組分別與hUCMSCs組比較，各組血清MCP-1、SDF-1水平相當（p均>0.05）；hUCMSC-MVs低、中、高濃度組之間互相比較，各組血清MCP-1、SDF-1水平相當（p均>0.05）；MTX組與hUCMSCS組血清MCP-1、SDF-1水平接近（p均>0.05）。CIA組血清IP-10水平較正常對照組升高，但無統(tǒng)計學差異（P

11、>0.05）；CIA組與各干預組血清IP-10水平接近（P>0.05）。
　　（2）hUCMSCs對CIA大鼠踝關節(jié)滑膜中趨化因子表達的影響:CIA組大鼠MCP-1、SDF-1、IP-10表達強陽性，同時滑膜組織增生；正常組滑膜中MCP-1、SDF-1、IP-10呈弱陽性或陰性表達；各干預組滑膜中MCP-1、SDF-1、IP-10呈弱陽性表達。通過半定量分析， CIA組滑膜中MCP-1、SDF-1、IP-10表達較正常對照組明顯升

12、高（P<0.05）；CIA組較MTX組MCP-1、SDF-1、IP-10表達明顯升高（P<0.05）；CIA組較hUCMSCS組MCP-1、SDF-1、IP-10表達明顯升高（P<0.05）；CIA組分別與hUCMSC-MVs低、中、高濃度組比較，CIA組滑膜中MCP-1、SDF-1、IP-10表達明顯升高（P<0.05）；MTX組分別與hUCMSC-MVs各組比較，低濃度組滑膜中MCP-1、SDF-1、IP-10表達明顯升高(P<0.

13、05)；hUCMSCs組分別與hUCMSC-MVs各組比較，低濃度組滑膜中MCP-1、SDF-1表達明顯升高(P<0.05)，低、中濃度組滑膜中IP-10表達明顯升高（P<0.05）；hUCMSC-MVs各濃度組之間比較，低濃度組滑膜中MCP-1、SDF-1、IP-10表達較中、高濃度組明顯升高（P<0.05）；hUCMSC組滑膜MCP-1、SDF-1、IP-10表達與MTX組接近（P>0.05）。
　　結論：
　　1.hU

14、CMSC-MVs可明顯抑制CIA大鼠滑膜炎癥。
　　2.hUCMSC-MVs可通過降低CIA大鼠血清中趨化因子MCP-1、SDF-1水平減輕滑膜炎癥，不同濃度hUCMSC-MVs作用相當，且MVs與其母體細胞hUCMSC、MTX作用相當。
　　3.hUCMSC-MVs可通過抑制CIA大鼠滑膜中趨化因子MCP-1、SDF-1、IP-10表達減輕滑膜炎癥，hUCMSC-MVs高濃度組作用優(yōu)于低、中濃度組，MVs高濃度組與其母體細