重組MMP-2對(duì)人腎系膜細(xì)胞趨化黏附單核細(xì)胞的作用機(jī)制探討.pdf

1、目的:細(xì)胞因子尤其是趨化因子吸引單核-巨噬細(xì)胞等進(jìn)入腎小球系膜區(qū)和腎小管間質(zhì)是始動(dòng)糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)的早期事件,而基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)是重要的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)降解酶,主要參與Ⅳ型膠原的降解,與DN的關(guān)系非常密切。MMP-2能否影響人腎小球系膜細(xì)胞(Human Renal mesangi

2、al cells,HRMCs)Fractalkine(CX3CL1,Fkn)及單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的產(chǎn)生尚未明確。因此,本研究旨在觀察重組MMP-2干預(yù)后的HRMCs對(duì)人單核細(xì)胞株U937細(xì)胞趨化和黏附功能的影響,并探討其在DN發(fā)病機(jī)制中的可能作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)后,換用無血清的RPM11640培養(yǎng)液同步化饑餓24h后,用重組MMP-2干預(yù)HRMCs。用Transwell小室裝置檢測(cè)趨化單核細(xì)胞的功能,用熒

3、光染色法檢測(cè)HRMCs黏附單核細(xì)胞的功能；用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)Fkn mRNA與MCP-1 mRNA的表達(dá),Western blot法檢測(cè)Fkn與MCP-1蛋白的表達(dá),ELISA法檢測(cè)HRMCs干預(yù)上清液中Fkn與MCP-1蛋白含量。
　　 結(jié)果:1.MMP-2組HRMCs趨化單核細(xì)胞數(shù)高于空白組(P<0.05)。2.MMP-2組HRMCs黏附單核細(xì)胞數(shù)低于空白組(P<0.05)。3.MMP-2干預(yù)HRMC

4、s后Fkn與MCP-1mRNA的表達(dá)量高于空白對(duì)照組(P<0.05)。4.MMP-2干預(yù)HRMCs后Fkn與MCP-1蛋白的表達(dá)量高于空白對(duì)照組(P<0.05)。5.MMP-2干預(yù)HRMCs后上清液中Fkn與MCP-1的濃度較空白對(duì)照組顯著降低(P<0.01)。
　　 結(jié)論:1.MMP-2可增加HRMCs的Fkn與MCP-1的mRNA表達(dá)。2.MMP-2可增加HRMCs的Fkn與MCP-1的蛋白表達(dá)。3.MMP-2可下調(diào)干預(yù)上清