單核細(xì)胞趨化蛋白-1對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長的影響及金雀異黃素的干預(yù)作用.pdf

1、目的：研究單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(hUVECs)生長的影響、可能機(jī)制及金雀異黃素的干預(yù)作用。 方法：1.培養(yǎng)并鑒定人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。2.用不同濃度單核細(xì)胞趨化蛋白-1(0.1ng/ml,1.0ng/ml，10ng/ml，100ng/ml)對其作用24h、48h；先用MTT比色法觀察細(xì)胞存活率、流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞DNA含量及細(xì)胞周期觀察其hUVECs生長的影響，瓊脂糖凝膠電泳檢測細(xì)胞染色體“DNAl

2、adder”的形成、AnnexinV/PI雙染細(xì)胞流式細(xì)胞儀觀察內(nèi)皮細(xì)胞凋亡；流式細(xì)胞技術(shù)及Western印跡法檢測凋亡相關(guān)蛋白Fas、Bcl-2、Bax的表達(dá)，探討MCP-1誘導(dǎo)hUVECs凋亡的可能機(jī)制。3.選擇單核細(xì)胞趨化蛋白-1對hUVEC凋亡作用效果較明顯的劑量組加入不同濃度的金雀異黃素(0.1μmol、1μmol、10μmol、50μmol)作用24h，觀察其對單核細(xì)胞趨化蛋白-1誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用及對Bc

3、l-2、Bax、Fas表達(dá)的影響。 結(jié)果：1.膠原酶灌注消化收集細(xì)胞，胰蛋白酶—EDTA混合液消化傳代可以獲得滿意的hUVECs，vWF和KDR染色證實(shí)培養(yǎng)細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。2.單核細(xì)胞趨化蛋白-1能誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡(P＜0.05/P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)，其效應(yīng)隨濃度和時(shí)間的增加而增強(qiáng)：MTT明顯減低；細(xì)胞DNA含量減少，出現(xiàn)亞G0/G1峰(凋亡細(xì)胞峰)；AnnexinV/PI顯示凋亡細(xì)

4、胞明顯增加；細(xì)胞DNA呈明顯的“DNAladder”；MCP-1抑制Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)Fas、Bax的表達(dá)。3.金雀異黃素抑制單核細(xì)胞趨化蛋白-1誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，抑制效應(yīng)隨劑量增加而增強(qiáng)(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)。與對照組比較(10ng/mlMCP-1)，MTT明顯增加；凋亡細(xì)胞明顯減少，Bcl-2表達(dá)明顯增加，F(xiàn)as、Bax表達(dá)明顯降低。 結(jié)論：單核細(xì)胞趨化蛋白-1能誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，