單核細胞趨化蛋白-1對人臍靜脈內皮細胞生長的影響及金雀異黃素的干預作用.pdf

1、目的：研究單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)對人臍靜脈內皮細胞(hUVECs)生長的影響、可能機制及金雀異黃素的干預作用。 方法：1.培養(yǎng)并鑒定人臍靜脈內皮細胞。2.用不同濃度單核細胞趨化蛋白-1(0.1ng/ml,1.0ng/ml，10ng/ml，100ng/ml)對其作用24h、48h；先用MTT比色法觀察細胞存活率、流式細胞技術檢測細胞DNA含量及細胞周期觀察其hUVECs生長的影響，瓊脂糖凝膠電泳檢測細胞染色體“DNAl

2、adder”的形成、AnnexinV/PI雙染細胞流式細胞儀觀察內皮細胞凋亡；流式細胞技術及Western印跡法檢測凋亡相關蛋白Fas、Bcl-2、Bax的表達，探討MCP-1誘導hUVECs凋亡的可能機制。3.選擇單核細胞趨化蛋白-1對hUVEC凋亡作用效果較明顯的劑量組加入不同濃度的金雀異黃素(0.1μmol、1μmol、10μmol、50μmol)作用24h，觀察其對單核細胞趨化蛋白-1誘導的人臍靜脈內皮細胞凋亡的干預作用及對Bc

3、l-2、Bax、Fas表達的影響。 結果：1.膠原酶灌注消化收集細胞，胰蛋白酶—EDTA混合液消化傳代可以獲得滿意的hUVECs，vWF和KDR染色證實培養(yǎng)細胞為內皮細胞。2.單核細胞趨化蛋白-1能誘導人臍靜脈內皮細胞的凋亡(P＜0.05/P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)，其效應隨濃度和時間的增加而增強：MTT明顯減低；細胞DNA含量減少，出現(xiàn)亞G0/G1峰(凋亡細胞峰)；AnnexinV/PI顯示凋亡細

4、胞明顯增加；細胞DNA呈明顯的“DNAladder”；MCP-1抑制Bcl-2的表達，促進Fas、Bax的表達。3.金雀異黃素抑制單核細胞趨化蛋白-1誘導的人臍靜脈內皮細胞凋亡，抑制效應隨劑量增加而增強(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01)。與對照組比較(10ng/mlMCP-1)，MTT明顯增加；凋亡細胞明顯減少，Bcl-2表達明顯增加，F(xiàn)as、Bax表達明顯降低。 結論：單核細胞趨化蛋白-1能誘導人臍靜脈內皮細胞凋亡，