血小板源性生長因子-B(PDGF-B)信號通路在胃癌轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制的實驗研究.pdf

1、第一部分 PDGF-B和PDGFR-β在胃癌組織的表達(dá)及其臨床意義
　　目的:探討血小板源性生長因子B(PDGF-B)和血小板源性生長因子受體β(PDGFR-β)在胃癌組織中的表達(dá)情況及其臨床意義。
　　方法:采用免疫組化SP法檢測32例胃癌手術(shù)標(biāo)本中胃癌組織及其對應(yīng)的正常胃粘膜組織中PDGF-B和PDGFR-β的表達(dá)情況，并與胃癌患者臨床資料進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:胃癌組織中PDGF-B主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞，陽性率

2、70.3％(45/64)，PDGFR-β主要表達(dá)于腫瘤間質(zhì)細(xì)胞，陽性率60.9％(39/64);均明顯高于正常的胃粘膜組織中的PDGF-B陽性率4.7％(3/64)和PDGFR-β的陽性率3.1％(2/64)(P＜0.05)。PDGF-B和PDGFR-β的表達(dá)與腫瘤浸潤深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期呈正相關(guān)(P＜0.05）;與腫瘤分化程度沒有相關(guān)性(P＞0.05）。
　　結(jié)論:PDGF-B和PDGFR-β在胃癌組織中高表達(dá)并與胃癌的進(jìn)

3、展及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切;檢測PDGF-B和PDGFR-β的表達(dá)可以作為判斷胃癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的指標(biāo)之一。
　　第二部分:PDGF-B慢病毒載體的構(gòu)建、包裝和PDGF-B過表達(dá)胃癌細(xì)胞株的構(gòu)建
　　目的:構(gòu)建PDGF-B的慢病毒載體pLeno-DCE-PDGF-B并轉(zhuǎn)染成功構(gòu)建PDGF-B穩(wěn)定過表達(dá)的胃癌細(xì)胞。
　　方法:構(gòu)建PDGF-B慢病毒載體pLeno-DCE-PDGF-B，感染293T細(xì)胞，收集上清液測定病毒滴度。用慢病毒

4、轉(zhuǎn)染SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞株，用免疫熒光觀察和western-blot方法鑒定PDGF-B穩(wěn)定過表達(dá)胃癌細(xì)胞構(gòu)建結(jié)果。
　　結(jié)果:通過PCR及酶切鑒定成功構(gòu)建pLeno-DCE-PDGF-B載體，包裝并得到高滴度的病毒顆粒。用慢病毒轉(zhuǎn)染后SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞免疫熒光觀察呈綠色熒光，轉(zhuǎn)染后SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中PDGF-B蛋白表達(dá)明顯高于常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞(P＜0.

5、05)。
　　結(jié)論:用慢病毒構(gòu)建方法可成功構(gòu)建并包裝得到高滴度的PDGF-B慢病毒顆粒;采用PDGF-B慢病毒轉(zhuǎn)染可成功構(gòu)建PDGF-B穩(wěn)定過表達(dá)的胃癌細(xì)胞。
　　第三部分PDGF-B過表達(dá)對胃癌細(xì)胞生長，侵襲能力的影響及其機(jī)制
　　目的:探討PDGF-B過表達(dá)對胃癌細(xì)胞株生長和侵襲能力的影響及其機(jī)制。
　　方法:慢病毒載體轉(zhuǎn)染構(gòu)建PDGF-B穩(wěn)定過表達(dá)胃癌細(xì)胞株。用MTT法和Transwell侵襲實驗分別檢測P

6、DGF-B穩(wěn)定過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞及常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞的生長和侵襲能力，并進(jìn)行相互比較分析。采用Western-blot法檢測PDGF-B過表達(dá)前后AKT-1和E-cadherin蛋白在SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞的生長曲線明顯高于常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞(P＜0.05)。PDGF-B

7、過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞的侵襲數(shù)量分別為65.4±2.4和70.2±3.2，明顯多于常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞的21.6±1.6和30.2±2.2(P＜0.05)。PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中AKT-1蛋白表達(dá)明顯高于常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞(P＜0.05)，E-cadherin蛋白在PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞和常規(guī)SGC7901和B

8、GC823胃癌細(xì)胞中的表達(dá)沒有明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:PDGF-B過表達(dá)可以明顯增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的生長和侵襲能力，可能與胃癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)。其機(jī)制可能與PDGF-B自分泌作用激活PI3K/AKT通路相關(guān)。
　　第四部分PDGF-B信號通路與上皮間質(zhì)化和胃癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及其機(jī)制
　　目的:探討PDGF-B信號通路與上皮間質(zhì)化和胃癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性及其作用機(jī)制。
　　方法:采用Western-blot方法檢測P

9、DGF-B過表達(dá)前后SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中AKT-1、ERK-1、E-cadherin和N-cadherin的蛋白表達(dá)情況，并進(jìn)行比較分析。采用細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)模擬激活PDGF-B信號通路，用Western-blot和RT-PCR方法檢測共培養(yǎng)情況下常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞，共培養(yǎng)情況下PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中AKT-1、ERK-1、E-cadherin和N-cadherin

10、蛋白及mRNA表達(dá)情況，并進(jìn)行比較分析。
　　結(jié)果:PDGF-B過表達(dá)前后SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中ERK-1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)沒有明顯差異(P＞0.05）;PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中AKT-1蛋白表達(dá)明顯高于常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞(P＜0.05)。共培養(yǎng)的PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中AKT-1和ERK-1蛋白

11、及mRNA的表達(dá)明顯高于常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞(P＜0.05)。上皮間質(zhì)化相關(guān)指標(biāo)E-cadherin蛋白及mRNA在共培養(yǎng)的PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中的表達(dá)明顯低于常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞(P＜0.05);上皮間質(zhì)化相關(guān)指標(biāo)N-cadherin蛋白及mRNA在PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞(P

12、＜0.05)。常規(guī)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞共培養(yǎng)前后AKT-1、ERK-1、N-cadherin和E-cadherin的蛋白表達(dá)沒有明顯差異(P＞0.05)。PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞共培養(yǎng)前后AKT-1蛋白表達(dá)沒有明顯差異(P＞0.05)，PDGF-B過表達(dá)SGC7901和BGC823胃癌細(xì)胞共培養(yǎng)前后ERK-1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)有明顯差異(P＜0.05）。