利用重疊延伸PCR技術(shù)在釀酒酵母中構(gòu)建木糖代謝相關(guān)基因.pdf_第1頁
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1、天津大學碩士學位論文利用重疊延伸PCR技術(shù)在釀酒酵母中構(gòu)建木糖代謝相關(guān)基因姓名：朱曼麗申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化工指導教師：元英進20090601ABSTRACTRenewablelignocellulosicmaterialsareconsideredtObetheattractivefeedstocksforethanolfuelproductionbyfermentationOnekeytechnologyincellulos

2、icethanolproductionistheCO—fermentationofbothglucoseandxylosewhichareproducedinpretreatmentandenzymolysisprocessesInordertofinallyconstructageneticallyengineeredSaccharomycesyeastthatcaneffectivelyCO—fermentglucoseandxyl

3、osetoethanol，thisstudyclonedthexylosemetabolicrelatedgenes—xylosereductaseandxylitoldehydrogenasebothfromPichiastipitisandNeurosporaerassa，putthemunderthecontrolofSaccharomycescerevisiaePGKpromoterandwillintegratethemint

4、othechromosomeofJcerevisiaehaploidwhichhashighethanoltoleranceTheresultsareasfollows：(1)ExtractedthegenomeDNAfromSaccharomycescerevisiae，PichiastipitisandNeurosporacrassacloned5targetgenes(SaccharomycescerevisiaePGKpromo

5、terPichiastipitisxyll／xyi2，Neurosporacrassaxyll／xyl2)throughPCRunder485“C，464“C，544“C，507℃，616“CTmtemperatureseperately(2)DevelopedtheoverlapextensionPCRmethod，andligatedthePGKpromoterwitheachgeneseperatelybythismethodin

6、steadofrestrictionenzymedigestionandvectorconstruction(3)SporulmionandhaploidizationofScerevisiaeCMCC2758whichhastolerancetohighethanolconcentration，transformedthishaploidwithpreparedtargetgeneswhichhave5SrRNAhomologouss

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