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文檔簡介
1、目的：本實驗通過檢測肝癌患者及正常對照XPD遺傳多態(tài)性，了解原發(fā)性肝癌的發(fā)生與XPD多態(tài)性有關(guān)，探討DNA修復(fù)基因XPD多態(tài)性和原發(fā)性肝癌易感性的關(guān)系。 方法：采用碘化鉀方法從抗凝血中提取基因DNA。PCR擴增XPD—751多態(tài)。各基因設(shè)計引物如下：XPD751：5'—GCCCGCTCTGGATTATACG—3'和5'—CTATCATCTCCTGGCCCCC—3'。PCR反應(yīng)：XPD—751、RCC1—194和XRCC1—399
2、。反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性2min，然后94℃30秒、57℃30秒、72℃45秒，30個循環(huán)后，72℃終延伸7min。XRCC1280將30個循環(huán)中的57℃改為59℃，其余條件同上。電泳分析PCR產(chǎn)物。對PCR產(chǎn)物進行酶切，XPD—751基因?qū)?yīng)的內(nèi)切酶為PstⅠ。取PCR產(chǎn)物5μl與相應(yīng)的限制性核酸內(nèi)切酶于37℃水浴過夜，用1.5％瓊脂糖凝膠電泳分析酶切產(chǎn)物。 結(jié)果：①94例肝癌患者XPD751基因Lys/Lys，Lys/Gln
3、，Gln/Gln多態(tài)基因型頻率分別為69(73.4％)，24(25.5％)和1(1.1％)，而111例健康對照組分別為97(87.4％)、14(12.6％)和0(0％)；兩組間比較有非常顯著的差異(p=0.011)。②經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)攜帶至少1個751Gln等位基因(Lys/Gln和Gln/Gln基因型)的個體患肝癌的危險顯著增高(OR=2.51，95％CI為1.22—5.181，p=0.011)。 結(jié)論：XPD—
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