十一方藥酒涂擦對兔膝關(guān)節(jié)軟骨損傷微骨折技術(shù)后軟骨修復的實驗研究.pdf

1、目的:隨著組織、細胞工程學近年來的發(fā)展，組織工程被利于治療關(guān)節(jié)軟骨缺損成為研究熱點已久。雖與已投入到臨床上使用的技術(shù)相比，組織工程用來修復關(guān)節(jié)軟骨缺損是一項新技術(shù)，但由于其出現(xiàn)的時間還尚短，技術(shù)也尚末十分成熟，還有相關(guān)的臨床研究仍在不斷探究。而微骨折技術(shù)以其操作創(chuàng)傷小，簡單，并發(fā)癥少等優(yōu)點已成為日前臨床上修復膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的常選擇的治療方法。本實驗旨在探討用十一方藥酒外涂治療關(guān)節(jié)軟骨損傷微骨折技術(shù)后軟骨修復情況以及提供實驗數(shù)據(jù)，從而更好

2、的服務、指導臨床工作。
　　 方法:1、模型制備及分組:用6～8月齡的成年新西蘭白兔40只，雌雄各半，在膝關(guān)節(jié)滑車關(guān)節(jié)面部制造成圓形全層軟骨缺損模型，最后形成直徑約4mm，深度約3mm的軟骨全層缺損。造模2周后再次手術(shù)切開左膝關(guān)節(jié)進行微骨折技術(shù)處理，手術(shù)第7天后從微骨折技術(shù)處理過的兔子中隨機選出24只兔子將其隨機平均分成三組即:實驗組A（藥酒）、對照組B（純酒）及空白對照組C，給予實驗組A和對照組B左膝部分別涂擦十一方藥酒和炮制

3、十一方藥酒用的純酒，2ml/次，3次/d。
　　 2、觀察指標:三個組于用藥干預滿8周、12周時用空氣栓塞法分別處死兔子4只，將兔左膝切開取材后肉眼大體觀察標本，拍照后立即將股骨遠端取下放入4％中性甲醛液中固定，以后對標本脫鈣后行石蠟包埋，常規(guī)切片，在光鏡下觀察包括HE染色和甲苯胺藍染色，根據(jù)wakitani評分標準評價標本的修復效果并進行統(tǒng)計學分析，以及Ⅱ型膠原的免疫檢測。
　　 結(jié)果:1、大體觀察:所有實驗用兔膝關(guān)節(jié)

4、活動正常，傷口愈合良好;膝關(guān)節(jié)無感染、滲液及粘連;膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)可見清亮的關(guān)節(jié)液，軟骨缺損區(qū)周圍的軟骨無明顯磨損及骨贅出現(xiàn)。用藥干預滿8周，A組軟骨缺損區(qū)的修復組織與周圍正常軟骨存在界限但較模糊、色澤較相近。修復組織的表面稍欠光滑，但具有一定的彈性。B組與C組外觀相似，軟骨缺損區(qū)被纖維組織部分充填，仍有空洞存在。用藥干預滿12周，A組修復組織表面已光滑，完全把缺損區(qū)填平，較有彈性，與周圍軟骨色澤很相近，界限已模糊不清。B組與C組缺損區(qū)仍可見

5、明顯的缺損，修復組織表面不平整。
　　 2、組織學觀察:用藥干預滿8周時對各組標本處理后在光鏡下觀察可見:A組修復組織表面比較光滑，填充組織與周圍兩側(cè)正常軟骨大部分結(jié)合。修復組織內(nèi)的細胞呈現(xiàn)橢圓形或圓形，并出現(xiàn)軟骨陷窩和軟骨囊。但跟周圍正常軟骨間還存在一定的差異，主要表現(xiàn)為新生組織內(nèi)細胞數(shù)量較多，細胞排列紊亂。修復組織的甲苯胺藍染色異染性還較明顯。B組標本光鏡下所見與C組相似觀察缺損區(qū)均可見大量空泡和纖維組織，修復組織與周圍組織

6、的愈合較差，軟骨細胞排列也較紊亂。用藥干預滿12周，A組標本修復組織為透明樣軟骨，其表面已光滑，與兩側(cè)正常軟骨組織愈合良好，細胞數(shù)目較前減少，呈現(xiàn)出的排列趨勢為柱狀。修復組織的甲苯胺藍染色跟周圍組織相近無明顯差異。B組和C組表現(xiàn)相似，修復表面仍不光滑，軟骨細胞的排列還不規(guī)則，仍有較多的纖維組織散在其間。跟周圍的軟骨組織愈合仍較差。修復組織的甲苯胺藍染色仍呈明顯異染性。
　　 三組實驗的組織學方面的評分:用藥干預滿8周、12周，A

7、組的軟骨缺損修復情況要優(yōu)于B及C組(P＜0.05）;B、C組的軟骨缺損修復情況無明顯差異(P＞0.05)。各組12周的軟骨缺損修復情況均優(yōu)于8周。
　　 3、Ⅱ型膠原的免疫組化:A組用藥干預滿8周，可見在修復組織內(nèi)部分軟骨細胞的胞漿呈現(xiàn)黃色，呈陽性的Ⅱ型膠原染色。B組和C組相似，細胞外間質(zhì)和細胞質(zhì)中Ⅱ型膠原染色呈現(xiàn)弱陽性（淺黃）;用藥干預滿12周，A組中修復組織的細胞呈橢圓形或圓形，呈現(xiàn)的排列趨勢為柱狀，Ⅱ型膠原表達呈現(xiàn)強陽性。