兔自體血紅細胞回注關(guān)節(jié)對兔膝關(guān)節(jié)軟骨影響的實驗研究.pdf

1、目的:以體外分離的自體血紅細胞進行大白兔膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射作為干預(yù)方式,分析紅細胞對關(guān)節(jié)軟骨的影響,以探討紅細胞對關(guān)節(jié)軟骨損害的機制及與時間之間的關(guān)系,并分析其發(fā)生變化的原因,為臨床對關(guān)節(jié)內(nèi)出血的合理治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.選用新西蘭大白兔18只,體重3.0±0.5kg。將18只實驗動物均用3％戊巴比妥(30mg/kg)行耳輪靜脈注射麻醉,然后從心包采自體靜脈血4ml,離心后取自體血紅細胞注入右側(cè)膝關(guān)節(jié)腔

2、內(nèi),作為實驗組,左側(cè)后膝關(guān)節(jié)作為空白對照組。于第4天將上述18只大白兔重復(fù)進行上述操作一次。再將18只動物隨機分為3組,每組6只。分別于第2、5、8周進行實驗。心包穿刺抽取全血6ml,加入抗凝劑,待分離血清,用于測定基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1和基質(zhì)金屬蛋白酶-3含量。抽血后立即處死動物,分別從右后膝關(guān)節(jié)(實驗組)及左后膝關(guān)節(jié)(對照組)取材,取材位置為股骨內(nèi)髁后部負重區(qū)的內(nèi)緣與外緣中點。大體觀察關(guān)節(jié)軟骨的色澤、質(zhì)地、光滑度,并做記錄。去除多

3、余軟骨下骨,置入含有1％氯代十六烷基吡啶的10％中性福爾馬林溶液固定48小時,用于組織切片。將股骨髁及脛骨平臺鋸下,置于密閉的操作箱內(nèi),切取關(guān)節(jié)軟骨。一半用于含水率的測定,即軟骨含水率:軟骨組織在含P2O5的真空條件下進行干燥。軟骨含水率=(軟骨濕重-軟骨干重)/軟骨濕重×100％。一半用于膠原含量的測定。即采用生化比色法測定軟骨膠原內(nèi)羥脯氨酸的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1.大體觀察:正常對照組關(guān)節(jié)軟骨表面光滑、均勻,

4、有光澤,呈瓷白色;實驗組關(guān)節(jié)軟骨表面粗糙且色澤稍暗。
　　 2.HE染色。
　　 正常關(guān)節(jié)軟骨表面光滑,軟骨細胞分布均勻,無簇聚軟骨細胞,潮線清晰完整。實驗組兔關(guān)節(jié)軟骨表面不光滑,可見細小碎屑。細胞排列也欠整齊,細胞分裂相增多,可見軟骨細胞簇聚,潮線變模糊。
　　 3.過碘酸雪夫氏反應(yīng)(PAS)染色。
　　 正常軟骨PAS染色法中軟骨組織基質(zhì)中的中性粘多糖呈紫紅色,軟骨細胞內(nèi)為無色。實驗組2周標(biāo)本中的紫紅

5、色減退,5周標(biāo)本中的紫紅色明顯減退,8周時標(biāo)本中的紫紅色恢復(fù)正常;提示軟骨基質(zhì)組織中蛋白粘多糖丟失隨時間延長而增多。
　　 4.Alcian Blue染色。
　　 正常軟骨AB染色法中由于軟骨組織基質(zhì)中的酸性粘多糖軟骨細胞周圍呈深藍色,基質(zhì)則呈淡藍色。實驗組2周標(biāo)本中的深藍色也減退,5周標(biāo)本中的深藍色明顯減退,8周時標(biāo)本中的深藍色恢復(fù)正常;提示軟骨基質(zhì)組織中軟骨基質(zhì)組織中硫酸軟骨素丟失隨時間延長而增多。
　　 5

6、.兔血清中基質(zhì)金屬蛋白酶-3與基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1含量的改變:
　　 對照組兔血清基質(zhì)金屬蛋白酶-3與基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1含量在第2、5和8周均無顯著性改變(P＞0.05)。實驗組兔血清基質(zhì)金屬蛋白酶-3在第2和5周顯著高于對照組(P＜0.05,P＜0.01);在第5周之前兔血清基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1的含量雖然有增高的趨勢,但與對照組比并無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 6.兔關(guān)節(jié)軟骨含水率的改變。

7、　　 對照組兔關(guān)節(jié)軟骨的含水率在第2、5和8周均無顯著性改變(P＞0.05)。與對照組相比,實驗組兔關(guān)節(jié)軟骨的含水率在第2和5周顯著性升高(P＜0.05,P＜0.01),在第8周無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 7.兔關(guān)節(jié)軟骨膠原蛋白含量的改變。
　　 對照組兔關(guān)節(jié)軟骨膠原蛋白含量在第2、5和8周均無顯著性改變(P＞0.05)。與對照組相比,實驗組兔關(guān)節(jié)軟骨膠原蛋白含量僅在第2周時顯著降低,第5和8周膠原蛋白含量無