自體富血小板血漿干預兔早期椎間盤退變的實驗研究.pdf

1、目的椎間盤退變(intervertebral disc degeneration，IDD)早期的生物學治療有望阻止甚至逆轉其病變過程。富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)含多種生物活性因子，如PDGF、TGF-β，IGF-1、VEGF等，這些生物活性因子具有刺激椎間盤細胞增殖、促進細胞外基質合成代謝及抑制纖維環(huán)細胞凋亡等功能。本研究通過全纖維環(huán)針刺法制備椎間盤早期退變模型并予以自體PRP干預，觀察自體PRP對

2、早期椎間盤退變的干預效果。
　　方法取健康成年新西蘭大白兔45只，體重2.5-3.0kg，雌雄不限。于兔耳中央動脈取血，采用Landesberg等的方法制備PRP，同時對全血及PRP行血小板計數(shù)。采用纖維壞針刺(L4/5、L5/6)的方法建立椎間盤退變模型，將所有兔子隨機分為3組(n=15)。實驗組：在模型建立2周時將100μlPRP分別注入L4/5、L5/6椎間盤；對照組：在相同間隙注入100μl的PBS液。假手術組：僅分離暴露

3、椎間盤，不作任何處理。在模型建立2周時及干預后第1、2周，每組隨機取5只兔子行腰椎MRI、組織學及Ⅱ型膠原免疫組織化學檢查，并進行兔腰椎MRI退變程度評分，HE染色形態(tài)學觀察及Ⅱ型膠原陽性積分光密度檢測。
　　結果血小板計數(shù)顯示兔PRP中血小板約為外周血的4.92倍。模型建立兩周時，和假手術組相比，實驗組和對照組腰椎手術節(jié)段椎間盤T2加權信號降低、變暗，組織學觀察示髓核細胞數(shù)量減少，基質退行性變，免疫組織化學染色示Ⅱ型膠原陽性積分

4、光密度降低，顯示造模成功。PRP干預后第1、2周，同一時間點觀察，腰椎MRI顯示實驗組退變程度及評分均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。干預后同一時間點觀察，對照組椎間盤結構紊亂，髓核細胞數(shù)量明顯減少。而實驗組髓核細胞數(shù)量及軟骨樣基質多，基質纖維化程度輕。和對照組相比，實驗組Ⅱ型膠原的表達明顯增強，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。實驗組PRP干預前后多個時間點連續(xù)觀察，Ⅱ型膠原表達的變化不明顯，而對照組Ⅱ型膠原表達隨時間呈