紅鰭東方鲀性別相關分子標記的篩選及數(shù)量形態(tài)特征比較.pdf

1、紅鰭東方鲀（Takifugu rubripes）為我國北方地區(qū)的優(yōu)良海水經濟魚類之一。近年來，對紅鰭東方鲀群體遺傳多樣性以及家系構建和培育等方面的研究逐漸增多，然而，與其性別有關的研究成果很少。本文運用多種方法對紅鰭東方鲀的性別進行研究。首先，本文對魚類性別相關基因和分子標記的研究現(xiàn)狀進行概述，為紅鰭東方鲀性別相關分子標記的篩選提供可行方案。緊接著，概括了魚類閾性狀選育的研究進展，為紅鰭東方鲀抗逆家系的選育擴展思路。其次，本文利用擴增片

2、段長度多態(tài)性（AFLP）和微衛(wèi)星(SSR)標記技術篩選紅鰭東方鲀性別相關的分子標記，期望通過現(xiàn)代分子生物學技術在其早期生長階段辨別雌、雄魚，篩選出雄性魚種養(yǎng)殖，對提高紅鰭東方鲀養(yǎng)殖的經濟效益和市場價值有重要的現(xiàn)實意義，也為其性別決定機制和性別相關基因的研究奠定基礎。最后，本文基于紅鰭東方鲀的形態(tài)指標，采用多元統(tǒng)計分析方法對紅鰭東方鲀的雌、雄差異進行分析，建立鑒別雌、雄差異的數(shù)學模型，旨在為紅鰭東方鲀繁育和選育過程中雌、雄性別的鑒別提供方

3、法和理論依據。
　　本研究的主要實驗結果如下：
　　1、利用擴增片段長度多態(tài)性（AFLP）技術篩選紅鰭東方鲀性別相關的分子標記。用紅鰭東方鲀雌、雄各5個個體篩選16對AFLP引物組合。在大約800bp處，引物組合（E+2-3，M+2-4）在5個雄性個體中都擴增出條帶，而在5個雌性群體中均未擴增出條帶。其它15個選擇性擴增引物組合在雌、雄各5個個體中沒有擴增出性別特異性條帶。引物篩選結果顯示，只有一個引物組合可以作為紅鰭東方鲀

4、性別相關的候選引物組合。該引物組合在紅鰭東方鲀雌、雄各30個個體中的擴增情況表明，在800bp附近處，在個體DNA水平上不存在雌、雄差異，因此，該候選條帶不是紅鰭東方鲀性別相關AFLP標記。嘗試選擇其它DNA標記技術篩選紅鰭東方鲀性別相關的分子標記。
　　2、利用微衛(wèi)星 DNA標記技術篩選紅鰭東方鲀性別相關的分子標記。用雌、雄各30個個體構建雌、雄基因池，利用66對微衛(wèi)星引物掃描雌、雄基因池。在雌、雄基因池中擴增出差異條帶的引物有

5、8對。用兩個各包括30個雌、雄個體的群體對這8對引物進行兩輪個體驗證。結果顯示：引物f383在雌性群體中只有極個別(3/30)個體中擴增出條帶，在雄性群體30個體中有23個個體擴增出條帶。引物f383經過2個紅鰭東方鲀群體共120個個體的驗證，在雌、雄個體中擴增出的條帶都出現(xiàn)差異極顯著的結果，差異等位基因片段在60個雌性個體中出現(xiàn)10次，頻率很低，為16.7％；而在雄性60個個體中出現(xiàn)51次，頻率極高，為85.0%。由此可知，引物f38

6、3該位點的差異片段對紅鰭東方鲀的性別極具雄性偏好性，該位點應該與紅鰭東方鲀性別決定區(qū)域存在相關關系。對性別差異條帶切膠回收、克隆和測序后，通過Blast比對，搜索這條序列的同源序列，結果表明這條序列為公布的紅鰭東方鲀第19號染色體上的一段，同源性高達98%，序列的覆蓋率達100%。
　　3、文本不僅用分子生物學的方法鑒別紅鰭東方鲀的性別，而且采用多元統(tǒng)計分析方法對紅鰭東方鲀的雌、雄差異進行分析。以紅鰭東方鲀雌、雄群體（72尾）的1

7、7個比例性狀為分析對象進行研究，主成分分析結果顯示，主成分分析獲得三個主成分，貢獻率分別為46.776%、27.668%和7.122%，3個主成分的積累貢獻率為81.566%，大多數(shù)雌、雄魚在三個主成分構成的三維空間中能分開。逐步判別分析結果顯示，篩選出2個比例性狀，即體寬/體長、體周長2/體長，建立了紅鰭東方鲀的雌雄判別模型，對雌雄個體的判別準確率為81.9%。用38尾紅鰭東方鲀樣本進行驗證，準確率達84.2%。方差分析結果顯示，體寬