全雌鯉魚育種技術(shù)及性別相關(guān)分子標(biāo)記研究.pdf

1、鯉魚的全雌育種具有重要的學(xué)術(shù)價值和顯著的經(jīng)濟價值。人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育與性逆轉(zhuǎn)相結(jié)合是全雌鯉魚育種的主要途徑，其中雌核發(fā)育魚與雜交魚的鑒別是該途徑的關(guān)鍵技術(shù)。全雌鯉魚育種的另一技術(shù)路線是先將魚苗混合轉(zhuǎn)性，然后通過性別相關(guān)分子標(biāo)記鑒別出假雄魚，前提是找到可用于鑒定遺傳性別的性別相關(guān)DNA分子標(biāo)記。建鯉是我國20世紀(jì)80年代末育成的鯉魚優(yōu)良品種，目前已成為我國鯉魚養(yǎng)殖的主導(dǎo)品種。本文以建鯉為材料進行全雌鯉魚育種技術(shù)及性別相關(guān)分子標(biāo)記研究，具體如

2、下： 以紫外線滅活的異源精子(紅鯽精子)誘導(dǎo)建鯉進行人工雌核發(fā)育，并采用RAPD技術(shù)對雌核發(fā)育后代進行分析，以鑒別雌核發(fā)育魚。人工雌核發(fā)育共獲得子一代魚241尾，根據(jù)形態(tài)特征分為Ⅰ型(建鯉體型)和Ⅱ型(鯉鯽雜種體型)，各取5尾進行RAPD分析。實驗篩選了10種隨機引物，共擴增得到建鯉的特征條帶35條，紅鯽的特征條帶31條，二者共有條帶26條。擴增結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5尾Ⅰ型魚有4尾僅出現(xiàn)建鯉特征條帶，未發(fā)現(xiàn)紅鯽特征條帶，為雌核發(fā)育魚，另一

3、尾Ⅰ型魚絕大多數(shù)擴增帶為建鯉特征帶，但引物OPY12擴增出一條分子量約為1220bp的紅鯽特征帶，推測系部分精子DNA片段滲入卵核所致，屬于部分雜交魚；全部Ⅱ型魚既有建鯉特征條帶，也出現(xiàn)紅鯽特征條帶，為鯉鯽雜交魚。結(jié)果表明，RAPD技術(shù)可高效、準(zhǔn)確地鑒別出異源精子誘導(dǎo)的雌核發(fā)育魚，不僅具有理論意義，而且有助于建立標(biāo)準(zhǔn)化的人工雌核發(fā)育技術(shù)，提高雌核發(fā)育魚篩選的準(zhǔn)確度和效率，促進雌核發(fā)育技術(shù)在魚類育種中的應(yīng)用。 采用RAPD和AFL

4、P技術(shù)，比較分析已知性別的雌雄建鯉的DNA差異，篩選性別相關(guān)的DNA分子標(biāo)記。RAPD分析選用了80個隨機引物對建鯉雌雄群體樣本進行擴增，從中篩選出條帶穩(wěn)定清晰的67個引物，其中有18個引物可以擴出群體水平的性別差異分子標(biāo)記，但未發(fā)現(xiàn)個體水平的性別差異分子標(biāo)記。AFLP分析從64對引物組合中篩選出9對引物對雌雄個體進行擴增，電泳圖譜條帶豐富，多態(tài)性位點比例高。通過對反應(yīng)條件的優(yōu)化處理，在引物E-ACG／M-CAA的擴增圖譜中找到一條雌性

5、特異的DNA條帶，分子量約323bp，雄性個體均無此條帶，初步發(fā)現(xiàn)了雌雄之間的遺傳差異，可為建鯉遺傳性別的鑒定提供參考；同時發(fā)現(xiàn)某些位點在雌性和雄性個體出現(xiàn)的比例存在很大差異，推測與遺傳性別有一定的關(guān)聯(lián)。另一方面，實驗中積累了AFLP分析的大量數(shù)據(jù)，9對選擇性擴增引物共擴增出1097個片段，其中264個片段(24.1％)為所有雌雄個體共有條帶，其余833個(75.9％)為多態(tài)性片段，片段大小在50-450bp之間。每對引物檢測出的位點數(shù)