2，3，7，8-四氯二苯并二噁英所致先天性腎積水的發(fā)生機制及其預防的實驗研究.pdf

1、目的：研究2，3，7，8-四氯二苯并二噁英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzodioxin，TCDD）所致先天性腎積水的發(fā)生機制，以及槲皮素對先天性腎積水的預防作用。 方法：1.利用TCDD誘導建立小鼠先天性腎積水動物模型。在C57BL/6J孕鼠第12個妊娠日（gestational day，GD），實驗組以TCDD（25μg/kg）灌胃，對照組以玉米油灌胃。GD18，統(tǒng)計胎鼠數及存活率；解剖胎鼠，觀察畸形發(fā)生

2、情況。對孕鼠及胎鼠的各主要臟器進行組織學檢查，并對胎鼠的腎臟及輸尿管進行超微結構觀察。 2.采用比較蛋白質組學方法探討TCDD致小鼠先天性腎積水的分子機制。GD12，TCDD組C57BL/6J孕鼠以TCDD（25μg/kg）灌胃，對照組孕鼠以玉米油灌胃。GD18，取胎鼠上尿路，提取組織總蛋白，進行雙向凝膠電泳，圖像分析兩組間差異表達的蛋白質點，將差異明顯的蛋白質點進行質譜分析后于數據庫中檢索鑒定，并應用免疫組化方法對鑒定出的蛋白

3、質進行驗證。體外培養(yǎng)GD12的胎鼠泌尿系統(tǒng)，Prx1組加peroxiredoxin1（Prx1）蛋白（終濃度為1：100），對照組加等量培養(yǎng)基，培養(yǎng)6天后，進行組織學檢查，了解輸尿管粘膜上皮增殖情況及輸尿管管腔有無狹窄。 3.觀察槲皮素對小鼠先天性腎積水的預防作用。GD12，C57BL/6J孕鼠隨機分為四組：對照組以玉米油灌胃，TCDD組以TCDD（25μg/kg）灌胃，槲皮素組以槲皮素（100 mg/kg）灌胃，TCDD+槲皮

4、素組以槲皮素（100 mg/kg）及TCDD（25μg/kg）灌胃。GD18，統(tǒng)計胎鼠數及存活率，檢查畸形發(fā)生情況，并留取胎鼠泌尿系統(tǒng)作組織學觀察及免疫組化檢測。 結果：1.實驗組胎鼠雙側腎積水及上段輸尿管積水發(fā)生率為100％（3級腎積水為86.2％，4級腎積水為13.8％）。實驗組胎鼠腎間質纖維化，中下段輸尿管粘膜移行上皮增生，管腔變窄，腎小管上皮細胞腫脹，結構模糊，可見膜性結構破裂，輸尿管上皮細胞核大，核仁明顯，靠邊，染色質

5、豐富，常染色質發(fā)達，異染色質少。對照組胎鼠腎臟及輸尿管未見異常。實驗組胎鼠腎積水發(fā)生率高于對照組（P<0.01）。 2.經雙向電泳、質譜分析及數據庫查詢后，最終在腎積水胎鼠上尿路中鑒定出12種表達增強的蛋白質，分別是：Prx1蛋白、鈣粘蛋白6、γ-肌動蛋白、根蛋白、結蛋白、Ⅱ型轉化生長因子β受體、嗜鉻顆粒蛋白B、血清白蛋白前體、轉鐵蛋白、假說蛋白LOC70984、Lipk蛋白和鋅指蛋白336。免疫組化結果顯示，Prx1蛋白在腎積

6、水胎鼠輸尿管粘膜上皮表達增強。經體外培養(yǎng)6天后，與對照組相比，Prx1組輸尿管粘膜上皮增生明顯，上皮層增厚，輸尿管管腔狹窄（P<0.01）。 3.槲皮素對小鼠先天性腎積水的預防作用。各組孕鼠每日體重增長無顯著差異（P>0.05），一般情況正常，無流產及早產，產仔數無顯著差異（P>0.05）；各組胎鼠體重無顯著差異（P>0.05），均為活胎，無死胎及吸收胎。對照組及槲皮素組胎鼠無腎盂及上段輸尿管積水發(fā)生。TCDD組胎鼠雙側腎盂及上

7、段輸尿管積水發(fā)生率為100％（3級腎積水84.1％，4級腎積水15.9％），TCDD+槲皮素組為13.4％（均為3級腎積水），差異具有顯著性（P<0.05）。免疫組織化學檢測結果：對照組與槲皮素組胎鼠輸尿管粘膜上皮Prx1蛋白均呈陰性表達；在TCDD組及TCDD+槲皮素組具有腎積水的胎鼠輸尿管粘膜上皮呈陽性表達。TCDD組胎鼠輸尿管粘膜上皮Prx1蛋白陽性表達率（100％）高于TCDD+槲皮素組（13.4％），差異具有顯著性（P<0.0

8、5）。 結論：1.TCDD誘導出的C57BL/6J胎鼠雙側腎積水動物模型在病理學表現上與人類腎盂輸尿管連接處梗阻（ureteropelvic junction obstruction，UPJO）相似，適用于UPJO的病因學及發(fā)病機制等方面的研究。 2.TCDD致胎鼠腎積水的分子機制與Prx1蛋白密切相關：TCDD通過誘導胎鼠氧化應激，使Prx1蛋白反應性升高以對抗氧化應激，同時刺激輸尿管粘膜上皮增生，致使其管腔變窄，產生