藥物預(yù)防四氯二苯二噁英誘導(dǎo)胎鼠腭裂發(fā)生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分、以形態(tài)與組織學(xué)為基礎(chǔ)篩選誘導(dǎo)胎鼠腭裂的TCDD最適劑量
　　目的:觀察在飼服不同四氯二苯二噁英(TCDD)劑量的作用下，胎鼠腭裂形成過(guò)程中的形態(tài)及組織學(xué)變化，以篩選TCDD誘導(dǎo)胎鼠腭裂模型的最適劑量。
　　方法:C57BL/6J孕鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)Ⅰ～Ⅳ組，每組6只;妊娠第10天，對(duì)照組以玉米油0.1ml灌胃，實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別以TCDD32、28、24、20μg/kg灌胃。妊娠第17.5天處死孕鼠，稱量

2、孕鼠及胚胎體重，記錄活胎鼠數(shù)、腭裂數(shù)、吸收胎及死胎鼠數(shù)。另取15只C57BL/6J孕鼠隨機(jī)分組同前，處理方法同前;各組分別于妊娠第13.5、14.5和15.5天剪取胎鼠頭部，解剖顯微鏡下觀察;并行蘇木精-伊紅染色，觀察。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)各組與對(duì)照組孕鼠增加的體重及活胎鼠體重的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組較對(duì)照組雙側(cè)腭突發(fā)育瘦小，上抬延遲;實(shí)驗(yàn)Ⅳ組雙側(cè)腭突發(fā)育及上抬與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。實(shí)驗(yàn)Ⅰ～Ⅳ組胎鼠腭裂

3、發(fā)生率分別為97.37％、93.02％、65.12％、56.82％，對(duì)照組未見胎鼠腭裂形成。
　　結(jié)論:TCDD28μg/kg是建立C57BL/6J胎鼠腭裂模型的最適劑量。
　　第二部分、葉酸、白藜蘆醇和α-萘黃酮對(duì)TCDD致胎鼠腭裂的拮抗作用研究
　　目的:進(jìn)一步探討葉酸、白藜蘆醇和α-萘黃酮預(yù)防TCDD致胎鼠腭裂發(fā)生的作用并比較三種藥物的效果。
　　方法:將孕鼠隨機(jī)分為11組，每組8只。TCDD組于GD10以

4、TCDD28μg/kg灌胃。葉酸處理孕鼠分3組:分別于GD10以葉酸15、10、5 mg/kg+TCDD28μg/kg灌胃。α-萘黃酮處理孕鼠分2組:分別于GD10以α-萘黃酮5mg/kg、50μg/kg+TCDD28μg/kg灌胃;對(duì)照組以玉米油0.1 ml灌胃。白藜蘆醇處理孕鼠分3組:GD8～13組，以50 mg/kg白藜蘆醇于GD8～13灌胃6次;白藜蘆醇GD8～13+TCDD組，以白藜蘆醇50 mg/kg于GD8～13灌胃6次，

5、TCDD28μg/kg于GD10灌胃1次;白藜蘆醇GD10+TCDD組，以白藜蘆醇50 mg/kg及TCDD28μg/kg于GD10灌胃;設(shè)對(duì)照組以等量羧甲基纖維素鈉溶液于GD8～13灌胃及玉米油0.1ml于GD10灌胃。GD17.5處死孕鼠，稱量孕鼠及胚胎體重，記錄活胎鼠數(shù)、腭裂數(shù)、吸收胎及死胎鼠數(shù);并剪取胎鼠頭部，解剖顯微鏡下觀察。
　　結(jié)果:TCDD28μg/kg所致胎鼠腭裂發(fā)生率為92.86％，對(duì)照組未見胎鼠腭裂形成。TC

6、CD+葉酸15、10、5 mg/kg3組致胎鼠腭裂發(fā)生率分別為84.00％、73.08％、86.00％。TCCD+α-萘黃酮5mg/kg、50μg/kg2組致胎鼠腭裂發(fā)生率分別為65.52％、74.00％。白藜蘆醇GD8～13、GD8～13+TCDD組、GD10+TCDD3組致胎鼠腭裂發(fā)生率分別為0.00％、57.78％、74.51％。白藜蘆醇GD8～13+TCDD組孕鼠每窩活胎數(shù)、死胎和吸收胎數(shù)，與對(duì)照組及TCDD組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義（P＜0.05）;其余各實(shí)驗(yàn)組孕鼠體重增加量、活胎鼠體重及每窩平均胎數(shù)、每窩活胎數(shù)與對(duì)照組相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:試驗(yàn)劑量的葉酸、白藜蘆醇和α-萘黃酮均有一定的拮抗TCDD誘導(dǎo)胎鼠腭裂發(fā)生的作用，以葉酸10 mg/kg、白藜蘆醇50 mg/kg（GD10一次飼服）、α-萘黃酮5mg/kg劑量的拮抗作用較強(qiáng)，三者作用效果無(wú)明顯差異。
　　第三部分、胎鼠腭突掃描電鏡觀察及Rho GDI蛋白的檢

8、測(cè)
　　目的:觀察TCDD、葉酸、白藜蘆醇和α-萘黃酮作用于孕鼠后對(duì)胎鼠腭突表面超微結(jié)構(gòu)及腭突組織中Rho GDI蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:孕鼠隨機(jī)分組，每組3只。GD10，TCDD組以TCDD28μg/kg灌胃，對(duì)照組以玉米油0.1 ml灌胃;葉酸組以葉酸10 mg/kg+TCDD28μg/kg灌胃;白藜蘆醇組以白藜蘆醇50 mg/kg+TCDD28μg/kg灌胃;α-萘黃酮組以α-萘黃酮5 mg/kg+TCDD28μg

9、/kg灌胃。分別于GD13.5、14.5和15.5剪取胎鼠頭部，掃描電鏡觀察腭突表面超微結(jié)構(gòu);免疫組化檢測(cè)GD17.5胎鼠腭突組織中Rho GDI蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:TCDD組腭中嵴上皮細(xì)胞表面逐漸破裂、皺縮，偽足結(jié)構(gòu)逐漸減少、消失，最終形成腭裂;對(duì)照組、葉酸組、白藜蘆醇組和α-萘黃酮組腭中嵴上皮細(xì)胞表面光滑整齊、飽滿膨脹，表面絲狀偽足逐漸增多、延長(zhǎng)，一直持續(xù)到腭突融合結(jié)束。免疫組化結(jié)果顯示，Rho GDI蛋白在對(duì)照組胎鼠腭突