實時熒光PCR技術檢測轉基因植物的初步研究.pdf

1、自轉基因生物問世以來,許多農(nóng)業(yè)公司利用包括轉基因技術在內的現(xiàn)代生物技術開發(fā)出了很多新的植物品系。由于轉基因存在的安全性問題使得轉基因生物產(chǎn)品的標簽問題成為公眾關注的主要熱點,標識制度的推行增加了消費者的知情權和選擇權,目前已有30個國家制定了相應的法律法規(guī)對轉基因作物及其衍生產(chǎn)品進行標簽,而標識制度的有效監(jiān)督和實施在某種程度上依賴于轉基因檢測水平的不斷提高。目前,許多未經(jīng)標簽和認證的轉基因生物及其深加工產(chǎn)品可能已經(jīng)進入中國市場,這就迫切

2、需要合適的檢測手段以確定這些食品中是否含有轉基因成分。
　　實時熒光定量PCR技術,是近幾年發(fā)展起來的一項分子生物學檢測技術,由于它使用了熒光標記,提高了檢測的準確性和靈敏度,不需對PCR產(chǎn)物進行后期處理,避免了交叉污染,克服了以往PCR技術中存在的假陽性污染和不能進行準確定量的缺點,同時也提高了檢測速度和自動化程度,目前已經(jīng)被廣泛的應用于很多領域之中。
　　本文以轉Bt基因抗蟲水稻和轉基因抗蟲玉米MON810為研究材料,分

3、別從定性和定量PCR檢測兩個方面建立了有效的轉基因檢測技術體系。論文工作取得的主要研究結果如下:
　　1、以轉Bt基因“克螟稻”為材料,利用普通CTAB法和DNA提取試劑盒分別對其提取DNA,比較顯示:試劑盒法明顯優(yōu)于普通CTAB法,能滿足熒光定量PCR檢測對模板DNA的要求。
　　2、在定性檢測的基礎上,用Taqman探針法對轉Bt基因水稻的NOS和Bt外源基因進行了熒光定量檢測分析,并成功地對自配已知濃度的轉基因水稻進行

4、了定量檢測,檢測值與實際值較為接近,檢測下限為0.05％,表明該體系具有較高的準確度和靈敏度。
　　3、針對轉基因抗蟲玉米MON810的轉化事件序列設計特異探針和引物,通過優(yōu)化實驗對其熒光定量檢測體系進行分析,建立了玉米MON810的最佳檢測體系。
　　4、利用上述特異探針和引物,對MON810和其它轉基因玉米品系T25、Bt11、Bt176同時進行定量分析,結果顯示:只有MON810有熒光信號,說明該體系具有很好的品系特異