轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品核酸檢測新技術(shù)研究.pdf

1、申請上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文申請上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品核酸檢測新技術(shù)研究轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品核酸檢測新技術(shù)研究姓名：名：郭金超郭金超學(xué)號：號：0070809064班級：級：A0708092導(dǎo)師：師：張大兵張大兵教授教授劉建華劉建華教授教授專業(yè)：業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：研究方向：轉(zhuǎn)基因生物檢測轉(zhuǎn)基因生物檢測上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院2011年8月上海交通大學(xué)博士論文

2、中文摘要轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品核酸檢測新技術(shù)研究轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品核酸檢測新技術(shù)研究摘要摘要在過去的15年中，轉(zhuǎn)基因作物在全球范圍內(nèi)得到了快速的發(fā)展。截至2010年底，商業(yè)化轉(zhuǎn)基因作物的種植面積達(dá)到1.48億公頃，比1996年增長了近87倍。由于人們對轉(zhuǎn)基因生物安全性的擔(dān)心和憂慮，許多國家和地區(qū)紛紛出臺了包括對轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)簽制度在內(nèi)的管理制度，對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行標(biāo)識和追溯管理。因此，開展轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測方法的研究對這些法規(guī)的實(shí)施十分重要。目

3、前，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測主要基于定性和定量PCR方法，由于越來越多轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)入市場，研究自動、快速、高通量的新型檢測方法成為國內(nèi)外轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測方法研究的熱點(diǎn)。本論文圍繞新的轉(zhuǎn)基因的作物的內(nèi)源參照基因、品系特異性檢測方法，以及新型的轉(zhuǎn)基因成分核酸高通量篩選、鑒定檢測方法展開了一系列研究，并獲得了重要的研究成果。1、為建立我國新批準(zhǔn)商業(yè)化種植的轉(zhuǎn)基因番木瓜“華農(nóng)1號”轉(zhuǎn)化體特異性檢測方法，研究中首先尋找并驗證了一個適合于轉(zhuǎn)基因番木瓜檢測的內(nèi)源

4、參照基因Chymopapain(CHY)，建立了其定性和定量PCR檢測方法，定性PCR方法中的檢測限為25拷貝，定量檢測限為12.5個拷貝單倍體番木瓜基因組。隨后，利用普通PCR和TAILPCR相結(jié)合的方法，分析了“華農(nóng)1號”番木瓜外源插入基因的序列信息，獲得了“華農(nóng)1號”番木瓜外源插入基因的5’端和3’端旁鄰序列，并根據(jù)其5’端旁鄰序列，設(shè)計了品系特異性定性、定量PCR引物和探針，建立了品系特異性定性、定量檢測方法。定性PCR檢測中，

5、檢測限可達(dá)到25個拷貝的單倍體番木瓜基因組，定量PCR檢測中，檢測限和定量檢測限分別可達(dá)到12.5和25個拷貝的番木瓜單倍體基因組DNA分子。對3個濃度水平的轉(zhuǎn)基因番木瓜樣品的檢測偏差都小于5%，檢測結(jié)果顯示了本研究中建立的番木瓜內(nèi)源參照基因、以及“華農(nóng)1號”轉(zhuǎn)基因番木瓜品系特異性檢測方法可實(shí)際應(yīng)用于實(shí)際樣品的檢測。2、為建立新型轉(zhuǎn)基因生物篩選檢測方法，我們基于目前轉(zhuǎn)基因作物中含有一些常用的、表達(dá)相同性狀的外源基因序列相似度高的特點(diǎn)，建