犬乳腺腫瘤病例的臨床與實(shí)驗(yàn)室診斷分析.pdf

1、犬乳腺腫瘤疾病是獸醫(yī)臨床常見的一種母犬腫瘤疾病。動(dòng)物發(fā)病的病因、腫瘤組織性質(zhì)、藥物和手術(shù)治療方法以及預(yù)后等都與人類乳腺腫瘤疾病較為相似。因此，自然發(fā)生的犬乳腺腫瘤疾病已成為人類乳腺腫瘤疾病最好的動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)收集自然發(fā)生病例，采用臨床病史調(diào)查、血清激素水平測(cè)定、病理組織學(xué)和免疫組織化學(xué)、原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、染色體分析、抗癌藥物篩選、p53基因易突變片段的RT-PCR檢測(cè)技術(shù)等方法進(jìn)行系統(tǒng)的研究，以期為犬乳腺腫瘤疾病的診斷利治療提供理論的

2、依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下： 1.試驗(yàn)以獸醫(yī)臨床上常見的自然發(fā)生犬乳腺腫瘤病例作為研究對(duì)象，首次在我國(guó)境內(nèi)從腫瘤病因?qū)W方向?qū)?6個(gè)病例進(jìn)行了系統(tǒng)分析，結(jié)果顯示：犬乳腺腫瘤病例多發(fā)于京叭犬、西施犬、德國(guó)牧羊犬及雜犬；發(fā)病年齡集中在10歲左右；未生育、未絕育、有假孕史及日糧以肉食為主的患犬多發(fā)；發(fā)生部位上多為單個(gè)乳腺發(fā)病，主要集中在右列乳膿及左右兩對(duì)腹股溝乳腺下方；且患犬雌二醇和孕酮水平較高。鑒于對(duì)本病的了解，實(shí)施外科手術(shù)方法將腫瘤組織予以

3、摘除，其中2例實(shí)施乳腺根除術(shù)，其余病例實(shí)施單個(gè)乳腺腫瘤摘除術(shù)；同時(shí)，對(duì)外科手術(shù)的術(shù)式提出改進(jìn)措施，從而為犬乳腺腫瘤疾病的獸醫(yī)臨床診斷和手術(shù)治療提供借鑒。 2.外科手術(shù)摘除腫瘤樣本52例，采用病理組織學(xué)觀察進(jìn)行分類，結(jié)果顯示：惡性乳腺腫瘤占73.08％，其中乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌占50％；良性腫瘤26.92％，其中良性混合瘤和腺肌上皮瘤35.71％。采用免疫組織化學(xué)方法，使用多種鼠抗人單克隆抗體標(biāo)記肌上皮細(xì)胞成分，鑒別腫瘤良惡性，并對(duì)患

4、犬預(yù)后進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示：鼠抗人單克隆抗體p63，Calponin，α-SMA，CK(AE1/AE3)，CK(34βE-12)，CD10，Bcl-2，Ki-67，E-cadherin等抗體能夠與犬相應(yīng)組織發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，p63是腫瘤組織肌上皮細(xì)胞敏感標(biāo)記物，Bcl-2可作為動(dòng)物預(yù)后指征之一。 3.選取新鮮腫瘤組織，采用組織塊直接培養(yǎng)和酶消化法建立了原代犬乳腺腫瘤細(xì)胞系。細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)學(xué)觀察表明：消化法培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)符合“S”形生

5、長(zhǎng)曲線，倍增時(shí)間為64.66h，細(xì)胞經(jīng)多次傳代之后形態(tài)無顯著差異；經(jīng)凍存前和復(fù)蘇后細(xì)胞活率檢測(cè)，結(jié)果均在90％以上；染色體核型分析顯示二倍體占主體，眾數(shù)2n=74，第38對(duì)染色體和X、Y染色體缺失；細(xì)胞免疫化學(xué)分析及異體動(dòng)物移植試驗(yàn)，結(jié)果顯示：細(xì)胞p63、Calponin、34βE-12、E-cadherin、VEGF五種抗體陽性反應(yīng)，并能夠使BALB/c小鼠致瘤，致瘤率40％，證實(shí)此腫瘤細(xì)胞系為腺肌上皮瘤細(xì)胞。 4.采用MTT

6、檢測(cè)和細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察法，證實(shí)甲基硒酸、亞硒酸鈉、長(zhǎng)春新堿等對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用；隨藥物濃度增加、與細(xì)胞作用時(shí)間延長(zhǎng)，藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用加強(qiáng)，其中10-3mmol/LNa2SeO3作用72h對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng)。 5.采用RT-PCR技術(shù)對(duì)正常乳腺組織、腫瘤乳腺組織以及乳腺腫瘤細(xì)胞中的p53基因易突變4～7片斷進(jìn)行擴(kuò)增和分析，結(jié)果顯示：與犬p53原序列同源，與人p53基因同源性達(dá)88％。結(jié)合病理組織學(xué)診斷和