SrPCS基因植物表達載體的構建及其對長喙田菁的遺傳轉化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以長喙田菁SrPCS基因的全長cDNA和質粒載體pBA002為基礎，構建植物表達載體，對超聲波處理花粉介導的長喙田菁遺傳轉化體系進行優(yōu)化，并嘗試通過超聲波處理花粉介導的遺傳轉化方法將SrPCS基因轉化長喙田菁。 主要研究結果如下： 1.根據pBYY(pBYY01，pBYY02，pBYY03)質粒上的序列設計特異引物，擴增出目的基因，并用SpeⅠ和XhoⅠ酶切目的基因和pBA002質粒載體，酶切后通過T4DNA連接酶

2、連接，連接產物轉化大腸桿菌，由陽性克隆菌提取的質粒經PCR檢測、酶切檢測和測序檢測均表示SrPCS基因的全長cDNA已經整合到質粒pBA002中，植物表達載體構建成功，命名為pBASrPCS(pBASrPCS1，pBASrPCS2)，為遺傳轉化長喙田菁和其他植物提供條件。 2.對超聲波處理花粉介導的長喙田菁遺傳轉化體系進行優(yōu)化。包括對影響花粉保存活力因素、超聲波處理緩沖液成份、超聲波處理參數(shù)等的優(yōu)化，結果顯示適宜花粉保存的溫度為

3、-20℃或者-70℃，超聲波處理緩沖液中以蔗糖濃度10％，硼酸濃度為100mg/L時效果最佳；超聲波處理參數(shù)以處理功率1002w、處理時間6s、處理次數(shù)4次為最適宜長喙田菁遺傳轉化的超聲波處理條件。 3.選用Basta作為抗性選擇劑對長喙田菁種子萌發(fā)進行預試驗，確定篩選濃度為4mg/L。 4.利用超聲波處理花粉介導的長喙田菁遺傳轉化方法將構建的植物表達載體pBASrPCS1導入長喙田菁，收獲長喙田菁種子經萌發(fā)篩選后獲得抗

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