SrPCS基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及其對長喙田菁的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、本研究以長喙田菁SrPCS基因的全長cDNA和質(zhì)粒載體pBA002為基礎(chǔ)，構(gòu)建植物表達(dá)載體，對超聲波處理花粉介導(dǎo)的長喙田菁遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化，并嘗試通過超聲波處理花粉介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法將SrPCS基因轉(zhuǎn)化長喙田菁。 主要研究結(jié)果如下： 1.根據(jù)pBYY(pBYY01，pBYY02，pBYY03)質(zhì)粒上的序列設(shè)計特異引物，擴增出目的基因，并用SpeⅠ和XhoⅠ酶切目的基因和pBA002質(zhì)粒載體，酶切后通過T4DNA連接酶

2、連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌，由陽性克隆菌提取的質(zhì)粒經(jīng)PCR檢測、酶切檢測和測序檢測均表示SrPCS基因的全長cDNA已經(jīng)整合到質(zhì)粒pBA002中，植物表達(dá)載體構(gòu)建成功，命名為pBASrPCS(pBASrPCS1，pBASrPCS2)，為遺傳轉(zhuǎn)化長喙田菁和其他植物提供條件。 2.對超聲波處理花粉介導(dǎo)的長喙田菁遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化。包括對影響花粉保存活力因素、超聲波處理緩沖液成份、超聲波處理參數(shù)等的優(yōu)化，結(jié)果顯示適宜花粉保存的溫度為

3、-20℃或者-70℃，超聲波處理緩沖液中以蔗糖濃度10％，硼酸濃度為100mg/L時效果最佳；超聲波處理參數(shù)以處理功率1002w、處理時間6s、處理次數(shù)4次為最適宜長喙田菁遺傳轉(zhuǎn)化的超聲波處理條件。 3.選用Basta作為抗性選擇劑對長喙田菁種子萌發(fā)進(jìn)行預(yù)試驗，確定篩選濃度為4mg/L。 4.利用超聲波處理花粉介導(dǎo)的長喙田菁遺傳轉(zhuǎn)化方法將構(gòu)建的植物表達(dá)載體pBASrPCS1導(dǎo)入長喙田菁，收獲長喙田菁種子經(jīng)萌發(fā)篩選后獲得抗