Rnux2對(duì)腫瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、在正常發(fā)育和一系列病理?xiàng)l件下（主要是纖維化和腫瘤轉(zhuǎn)移及侵襲），上皮細(xì)胞發(fā)生一種上皮表型向間質(zhì)表型的轉(zhuǎn)化稱為EMT。在這個(gè)過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去上皮特性，比如極性和細(xì)胞間聯(lián)接，從而獲得遷移能力，使其脫離上皮細(xì)胞群落從而侵入周圍組織，甚至遠(yuǎn)隔部位。因此，EMT被認(rèn)為是腫瘤發(fā)展轉(zhuǎn)移過(guò)程中重要的一步。TGF-β信號(hào)通路的激活在EMT過(guò)程中具有重要的作用，而Runx2是TGF-β通路中重要的組成部分，并且在腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。Runx

2、2是PEBP2/CBF轉(zhuǎn)錄因子家族的成員，可以調(diào)節(jié)MMPs、OPN和BSP等腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表達(dá)。在肺癌、乳腺癌等腫瘤中，Runx2表達(dá)明顯上調(diào)，并且其異常表達(dá)與細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)。研究表明，Runx2與惡性腫瘤中活化的通路（P13 K/AKT-MAPK/ERK和TGF-β-Smad通路）有著密切的關(guān)系，而這些通路的激活又是啟動(dòng)惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。本論文主要討論TGF-β誘導(dǎo)的EMT以及Runx2在其中可能發(fā)揮的作用，

3、并闡述信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　 本文首先通過(guò)免疫組化技術(shù)研究Runx2表達(dá)水平與腫瘤患者臨床-病理參數(shù)與預(yù)后的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)Runx2的表達(dá)與腫瘤患者的預(yù)后成負(fù)相關(guān)。我們進(jìn)一步通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究Runx2的具體作用機(jī)制，利用TGF-β1誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞A549發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，確定最適合的誘導(dǎo)濃度為5ng/ml，最佳誘導(dǎo)時(shí)間為72h。通過(guò)利用RNA干擾及轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默Runx2表達(dá)，研究其對(duì)腫瘤細(xì)胞EMT關(guān)鍵指標(biāo)的影響，證明了Run

4、x2在腫瘤細(xì)胞EMT過(guò)程中發(fā)揮了必要的作用。針對(duì)Runx2的作用機(jī)制，我們研究了TGF-β1刺激過(guò)程中Smad2/3、Smad1/5/8，PI3K/AKT和MAPK/ERK通路對(duì)Runx2表達(dá)的調(diào)控，發(fā)現(xiàn)TGF-β1通過(guò)磷酸化Runx2使其發(fā)生核轉(zhuǎn)位，Runx2與Smad2組成共調(diào)節(jié)復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。
　　 綜上所述，Runx2的表達(dá)影響腫瘤患者的預(yù)后，在細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)中，Runx2通過(guò)組成轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核