CHIP-EGFR信號通路調控胰腺癌上皮間質轉化的機制研究.pdf

1、胰腺癌是預后最差的惡性腫瘤之一，它具有惡性程度高、早期診斷困難的特點。80％的患者診斷時腫瘤已為進展期，失去了手術根治的機會。轉移是制約胰腺癌遠期生存的重要因素。因此明確胰腺癌轉移的分子機制，對胰腺癌的治療具有重要意義。本課題組前期研究發(fā)現泛素E3連接酶CHIP可以特異性結合并降解EGFR。在胰腺癌細胞中穩(wěn)定過表達CHIP蛋白可以抑制EGFR的表達，降低其侵襲和遷移能力。在穩(wěn)定抑制CHIP的胰腺癌細胞中EGFR的表達是升高的，侵襲和遷移

2、能力也相應增強。CHIP可對胰腺癌細胞侵襲和遷移產生影響，但其對胰腺癌細胞上皮間質轉化(EMT)是否具有調控作用仍不明確。因此將CHIP/EGFR信號通路作為本研究的研究對象，深入研究其對胰腺癌侵襲、遷移等惡性生物學行為的影響，驗證CHIP是否能通過降解EGFR調控胰腺癌細胞EMT，并探索其調控機制。
　　目的：1.明確CHIP蛋白調控胰腺癌細胞株侵襲、遷移能力是否是通過EGFR信號通路;
　　2.驗證CHIP/EGFR能否

3、介導胰腺癌細胞株上皮間質轉化。
　　3.初步探索CHIP/EGFR介導胰腺癌細胞株上皮間質轉化的機制。
　　方法：本研究使用課題組前期構建的CHIP穩(wěn)定過表達或抑制的PANC-1細胞株。通過脂質體瞬時轉染法轉染EGFR siRNA和EGFR過表達質粒改變細胞EGFR的表達，采用real-time PCR法和Western blot驗證轉染效果。成功轉染后，采用劃痕實驗、Transwell小室實驗檢測改變EGFR表達情況后CH

4、IP穩(wěn)定轉染細胞株的遷移和侵襲能力，明確CHIP是否通過調控EGFR對胰腺癌細胞株侵襲、遷移發(fā)揮調控作用。隨后，通過Western blot法檢測上皮間質轉化標志物和EGFR相關信號通路，初步探索CHIP/EGFR信號通路介導胰腺癌細胞株上皮間質轉化相關機制。
　　結果：1.在CHIP蛋白穩(wěn)定抑制的胰腺癌細胞株PANC-1amiRNA中，用siRNA干擾EGFR的表達，可以逆轉EGFR過表達導致的侵襲、遷移能力增強;
　　2

5、.在CHIP蛋白穩(wěn)定過表達的胰腺癌細胞株PANC-1CHIPOE中，轉染EGFR過表達質粒，可以逆轉EGFR抑制導致的侵襲、遷移能力減弱;
　　3.在PANC-1amiRNA中，EGFR相對對照組高表達，EMT的標志物也發(fā)生變化，上皮表型標志物E-cadherin表達降低，間質表型標志物N-cadherin，Vimentin表達升高，Slug蛋白表達也升高;在PANC-1CHIPOE中可以得到相反的結果。
　　4.實驗的結果

6、顯示，在PANC-1amiRNA中，用siRNA干擾EGFR的表達，可抑制EGFR下游的Src/FAK信號通路，E-cadherin表達升高，N-cadherin，Vimentin表達降低，Slug蛋白表達也降低，逆轉了CHIP穩(wěn)定抑制導致的上皮間質轉化。在PANC-1CHIPOE中過表達EGFR，激活了下游的Src/FAK信號通路，E-cadherin表達降低，N-cadherin，Vimentin表達升高，Slug蛋白表達也升高，發(fā)