DNMT3A-3B基因啟動子區(qū)SNPs與胃癌、食管癌遺傳易感性的研究.pdf

1、目的： 探討DNMT3A和DNMT3B啟動子區(qū)SNPs與胃癌、食管癌的遺傳易感性的關(guān)系。 方法： ①提取待檢人群外周血基因組DNA。②采用PCR-RFLP結(jié)合DNA測序技術(shù)檢測DNMT3B啟動子區(qū)SNPs位點-149C>T和-579G>T在待檢人群中的頻率分布，用SPSS13．0統(tǒng)計學軟件分析實驗結(jié)果。③熒光素酶活性分析檢測DNMT3B SNP-579G>T對其啟動子活性的影響。④在線預測DNMT3A候選啟動子序

2、列，篩選出啟動子區(qū)SNP位點-448A>G，熒光素酶活性分析檢測DNMT3A SNP-448A>G對其啟動子活性的影響。⑤采用PCR-RFLP結(jié)合DNA測序技術(shù)檢測此位點在待檢人群中的頻率分布，并評估該位點與胃癌、食管癌的遺傳易感性。 結(jié)果： ①189例健康對照組中DNMT3B-149C>T位點TT/CT基因型頻率為98．9％/1．1％；195例食管癌病例組中TT/CT基因型頻率為97．9％/2．1％；308例胃癌病例組

3、中TT/CT基因型頻率為97．9％/2．1％。DNMT3B-149C>T位點TT/CT基因型頻率在健康對照組和食管癌、胃癌患者中分布差異均沒有顯著性（P=0．43，P=0．62），健康對照組與病例組中均未檢測到CC基因型。②在350例健康對照組中DNMT3B-579G>T位點TT/（GT+GG）基因型頻率為79．7％/20．3％，197例食管癌病例組中為78．2％/21．8％，313例胃癌病例組中為88．2％/11．8％。DNMT3B-

4、579G>T位點TT基因型的個體與對照組相比，其患胃癌的易感性明顯升高（P=0．003，OR=1．90，95％CI：1．23-2．92）。含有DNMT3B-579G>T位點T等位基因的DNMT3Bpromoter-pGL3-Basic重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細胞24h后，熒光素酶活性約為含有G等位基因的2．5倍（P<0．001）。④在DNMT3A轉(zhuǎn)錄起始位點上游791bp-741bp找到最佳啟動子候選序列。④在291例健康對照中DNMT3A-

5、448A>G位點（AG+AA）/GG基因型頻率為34．7％/65．3％。⑤含有DNMT3A-448A>G位點A等位基因的DNM73A啟動子序列片段-pGL3-Basic重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細胞24h后，熒光素酶活性為含有G等位基因的2．1倍（P<0．001）。⑥D(zhuǎn)NMT3A-448A>G位點（AG+AA）/GG基因型在97例食管癌病例組中頻率為36．1％/63．9％，208例胃癌病例組中為51．0％/49．0％。攜帶DNMT3A-448A

6、>G位點（AG+AA）基因型的個體與健康對照組相比，其患胃癌的易感性明顯升高（P<0．01，OR=1．96，95％CI：1．36-2．81）。 結(jié)論： 1．DNMT3B啟動子區(qū)-149C>T位點SNP在不同人種間有顯著差異。 2．DNMT3B啟動子區(qū)-579TT提高了DNMT3B啟動子活性，并與胃癌的遺傳易感性有關(guān)聯(lián)。 3．DNMT3B啟動子區(qū)-149C>T與胃癌、食管癌的易感性無明顯的關(guān)聯(lián)，提示該位點不