基于候選基因的肝癌遺傳關(guān)聯(lián)研究及CD82啟動(dòng)子區(qū)SNPs的功能研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文基于候選基因的肝癌遺傳關(guān)聯(lián)研究及CD82啟動(dòng)子區(qū)SNPs的功能研究姓名：苑曉燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：衛(wèi)生毒理學(xué)指導(dǎo)教師：曹佳20070501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文1關(guān)聯(lián)研究中，研究對(duì)象包括434例肝癌患者和480例非癌癥對(duì)照，病例采集于廣西壯族自治區(qū)腫瘤醫(yī)院，居住地局限于廣西壯族自治區(qū)扶綏縣及其周邊地區(qū)，對(duì)照來(lái)自于同一地區(qū)的社區(qū)人群，對(duì)病例與對(duì)照組人群的性別、年齡、居住地等因素進(jìn)行頻數(shù)匹配。2關(guān)聯(lián)研究中，采用

2、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)一限制性酶切片段多態(tài)性(Polymerasechainreaction—restrictionljragmentlengthpolymorphism，PCRRFLP)方法對(duì)雌激素受體p(Estrogenreceptorp，ESI也)的4個(gè)SNP位點(diǎn)(G1082A、A1730G、rsl256054和T1057G)、雌激素代謝酶的8個(gè)SNP位點(diǎn)(CyPJ7尬pAI、C歸J『9唧39Arg、Cy尸J『9I／D、CyP朋J『Msp

3、I、CyP“JIle462Val、C印JBJVal432Leu、CD^仃Ala72Ser和CD^仃Vall58Met)和抗氧化酶的6個(gè)SNP位點(diǎn)(C甜勱S∞A1934C、脅s∞A1a16Val、ECS∞Ala40Tllr、E四0D心9213Gly、C4rC一262T和G^JPr0198Leu)進(jìn)行基因分型。采用片斷分析技術(shù)對(duì)及CyPJ『9的短串聯(lián)重復(fù)標(biāo)記(TTTA)n進(jìn)行基因分型。3在SNP的功能研究中，采用電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(Electr

4、ophoreticmobil時(shí)shiRassay，EMSA)檢測(cè)了CD舵啟動(dòng)子區(qū)T262G多態(tài)性位點(diǎn)對(duì)轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合的影響。采用雙熒光素酶報(bào)告基因瞬時(shí)轉(zhuǎn)染H印G2及293細(xì)胞，檢測(cè)調(diào)控區(qū)的兩個(gè)SNP位點(diǎn)(rs934178和T262G)對(duì)1572至493區(qū)段啟動(dòng)子活性的影響。4在遺傳關(guān)聯(lián)分析中，采用PHASE軟件構(gòu)建單倍型；采用心lequin軟件包計(jì)算LD模式的兩個(gè)參數(shù)(Lewontin’sD’及，)。采用SPSSl40統(tǒng)計(jì)軟件的非

5、條件Logistc回歸模型計(jì)算各基因型與肝癌風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，分析時(shí)首先對(duì)HBV攜帶狀態(tài)進(jìn)行分層，然后對(duì)性別、年齡、吸煙、飲酒等混雜因素進(jìn)行分層，結(jié)果經(jīng)性別、年齡、吸煙、飲酒及吸煙量(年包數(shù)，pack—year)等因素校正，對(duì)所有統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行Bonfenoni多重檢驗(yàn)校正。在功能研究中，采用SPSSl40統(tǒng)計(jì)軟件的單因素方差分析比較不同轉(zhuǎn)染組熒光素酶相對(duì)活性的差異。結(jié)果1在E熾2和雌激素代謝酶基因多態(tài)性與肝癌的遺傳易感性研究中，基因分型結(jié)果