食管癌、胃癌及其雙原發(fā)癌組織CDH1基因啟動子區(qū)CpG島甲基化的初步研究.pdf

1、目的:食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)和胃脲癌(gastric adenocarcinoma,GA)是我國最常見的兩種惡性腫瘤。同一個體發(fā)生食管鱗癌和胃腺癌,稱為食管/胃雙原發(fā)癌(esophageal/gastricdouble primary carcinoma,EGDC)。食管/胃雙原發(fā)癌個體內(nèi)外環(huán)境因素相同,但組織病理類型不同,因此它是甄別食管、胃癌中蛋白和基因變化差異的理

2、想模型,為研究食管癌、胃癌發(fā)病的分子機制、易感性和致癌危險因素等提供了良好的研究素材。
　　 目前認(rèn)為,惡性腫瘤發(fā)生的基因?qū)W機制有兩種:一是遺傳學(xué)機制,即DNA序列的改變,如基因突變、雜合缺失和微衛(wèi)星不穩(wěn)定等。另一種是表觀遺傳學(xué)機制,即DNA的基因外修飾,甲基化是其主要形式。甲基化可致基因失活,蛋白表達(dá)異常,從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。食管癌、胃癌的發(fā)生與多種基因的異常甲基化有關(guān)。研究表明,CDH1基因作為一重要的腫瘤抑制基因,在

3、食管癌、胃癌組織中有較高的甲基化頻率,但有關(guān)雙原發(fā)癌中該基因的甲基化情況尚未見文獻(xiàn)報道。本課題通過對比分析同一個體食管/胃雙原發(fā)癌和食管癌、胃癌組織中CDH1基因啟動子區(qū)CpG島甲基化變化特征及其與致癌危險因素的關(guān)系,以探討該基因甲基化與食管癌、胃癌及其雙原發(fā)癌發(fā)生的關(guān)系及兩腫瘤并發(fā)是否有相似的癌變分子基礎(chǔ)和致癌危險因素。
　　 方法:自河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院內(nèi)鏡科采集80例腫瘤患者(31例ESCC,31例GA和18例EGDC)的

4、癌組織(X2原發(fā)癌包括食管癌、胃癌)、癌旁對照組織及9例正常個體的食管和胃粘膜組織作為正常對照組織,并記錄其病史、個人相關(guān)資料和腫瘤家族史。用Wizard(R)Genomic DNAPurification Kit(A1620)試劑盒提取DNA,用CpGenomeTM DNAModification Kit(S7820)試劑盒進(jìn)行甲基化修飾后,采用MSP方法檢測CDH1基因啟動子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)。所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)

5、行分析,應(yīng)用X2檢驗、配對X2檢驗及Fisher's確切概率法比較各指標(biāo)的相互關(guān)系,檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1食管癌、癌旁對照及正常對照組織CDH1基因甲基化檢測結(jié)果
　　 1.1食管癌、癌旁對照及正常對照組織CDH1基因的甲基化陽性率分別為51.6％(16/31)、22.6％(7/31)和O％(0/9)。癌與癌旁對照比較,有顯著差異(X2=7.111,P=0.004)；癌與正常對照比較,有顯

6、著差異(P=0.006)；癌旁對照與正常對照比較,無顯著差異(P=..175)。
　　 1.2食管癌CDHl基因甲基化情況與其性別、年齡、煙酒史和上消化道腫瘤家族史比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。
　　 2胃癌、癌旁對照及正常對照組織CDHl基因甲基化檢測結(jié)果
　　 2.1胃癌、癌旁對照及正常對照組織CDH1基因的甲基化陽性率分別為61.3％(19/31)、41.9％(13/31)和O％(0/9)。癌與癌旁

7、對照比較,無顯著差異(X2=2.5,P=0.109);癌與正常對照比較,有顯著差異(P=0.001)；癌旁對照與正常對照比較,有顯著差異(P=0.019)。
　　 2.2胃癌CDH1基因甲基化情況與其性別、年齡、煙酒史和上消化道腫瘤家族史比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。
　　 3雙原發(fā)癌食管癌、癌旁對照及正常對照組織CDH1基因甲基化檢測結(jié)果
　　 3.1雙原發(fā)癌食管癌、癌旁對照及正常對照組織CDH1基因的

8、甲基化陽性率分別為66.7％(12/18)、33.3％(6/18)和0％(0/9)。癌與癌旁對照比較,有顯著差異(X2=4.167,P=0.031)；癌與正常對照比較,有顯著差異(P=0.001)；癌旁對照與正常對照比較,無顯著差異(P=0.071)。
　　 3.2雙原發(fā)癌食管癌CDH1基因甲基化情況與其性別、年齡、煙酒史和上消化道腫瘤家族史比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。
　　 4雙原發(fā)癌胃癌、癌旁對照及正常對照

9、組織CDH1基因甲基化檢測結(jié)果
　　 4.1雙原發(fā)癌胃癌、癌旁對照及正常對照組織CDH1基因的甲基化陽性率分別為77.8％(14/18)、44.4％(8/18)和0％(0/9)。癌與癌旁對照比較,無顯著差異(X2=1.786,P=0.180)；癌與正常對照比較,有顯著差異(P=0.000);癌旁對照與正常對照比較,有顯著差異(P=0.026)。
　　 4.2雙原發(fā)癌胃癌CDH1基因甲基化情況與其性別、年齡、煙酒史和上消化

10、道腫瘤家族史比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。
　　 5食管癌、胃癌和食管/胃雙原發(fā)癌組織CDHl基因甲基化情況比較
　　 5.1食管癌和雙原發(fā)癌食管癌組織CDH1基因的甲基化陽性率分別為51.6％(16/31)和66.7％(12/18),兩者比較無顯著差異(X2=1.054,P=0.305)。
　　 5.2胃癌和雙原發(fā)癌胃癌組織CDH1基因的甲基化陽性率分別為61.3％(19/31)和77.8％(14/18

11、),兩者比較無顯著差異(X2=1.408,P=0.235)。
　　 5.3食管癌和胃癌組織CDH1基因的甲基化陽性率分別為51.6％
　　 (16/31)和61.3％(19/31),兩者比較無顯著差異(X2=0.590,P=0.442)。
　　 5.4雙原發(fā)癌食管癌及胃癌組織中CDH1基因甲基化表達(dá)具有相關(guān)性(P=0.005),甲基化陽性率分別為66.7％和77.8％,兩者差異無統(tǒng)計學(xué)蒽義(X2=0.5,P=0.

12、500)。18例雙原發(fā)癌中,16例兩種癌組織中同時出現(xiàn)CDH1基因甲基化一致性改變(88.9％),12例(66.7％)兩種癌組織中均出現(xiàn)甲基化,4例(22.2％)兩種癌組織中均未出現(xiàn)甲基化。
　　 結(jié)論:
　　 1.在單發(fā)及雙原發(fā)癌食管鱗癌組織中,CDH1基因啟動子區(qū)CpG島甲基化陽性率均明顯增高。
　　 2.在單發(fā)及雙原發(fā)癌胃腺癌組織中,CDH1基因啟動子區(qū)CpG島甲基化陽性率均明顯增高。
　　 3.單

13、發(fā)及雙原發(fā)癌胃腺癌的癌旁對照組織均出現(xiàn)CDH1基因啟動子區(qū)CpG島甲基化陽性率的升高,與癌組織無顯著差異,與正常對照組織有顯著差異,提示CDH1基因甲基化分子水平變化可能早于病理的組織水平變化。
　　 4.同一個體雙原發(fā)癌食管鱗癌和胃腺癌組織中,CDH1基因啟動子區(qū)CpG島甲基化表達(dá)具有相關(guān)性,兩者甲基化陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義,提示雙原發(fā)癌中食管鱗癌和胃腺癌可能具有相似的分子改變—CDH1基因甲基化。
　　 5.無論在單