NF-κB在大鼠肝缺血再灌注損傷與IPC保護(hù)機(jī)制中的作用及異源性預(yù)處理的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 探討NF-κB在大鼠肝缺血再灌注損傷與缺血預(yù)處理(IPC)保護(hù)機(jī)制中的作用及異源性預(yù)處理(Heterologous Preconditioning，HPC)在肝臟的保護(hù)效應(yīng)。 方法： 將72只SD雄性大鼠隨機(jī)分成4大組，每大組再按肝缺血后再灌注不同時(shí)間分為3個(gè)時(shí)間組：(1)缺血再灌注損傷組(I/R組n=18)：阻斷肝蒂25分鐘后分別再灌注2、3、4h；(2)缺血預(yù)處理組(IPC組n=18)：阻斷肝左、中葉

2、入肝血流5分鐘后再灌注10分鐘(IPC)，然后處理同I/R組；(3)抑制劑組(PDTC組n=18)：先行腹腔注射NF-κB抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)，15分鐘后再按I/R組處理；(4)假手術(shù)組(S組n=18)：僅行麻醉開腹分離肝蒂，不做其它進(jìn)一步處理，取材時(shí)間同其它三組。各組大鼠在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)，分別取后腔靜脈血2ml，切取肝左、中葉及肝右葉留作實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)：(1)采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，天

3、冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，乳酸脫氫酶(LDH)活性；(2)測(cè)定肝臟的濕干比(W/D)；(3)肝臟經(jīng)HE切片染色后，行光鏡檢查，觀察肝組織顯微結(jié)構(gòu)；(4)肝組織中TNF-α表達(dá)的免疫組織化學(xué)分析；(5)分別應(yīng)用免疫組化和western blot免疫印跡法測(cè)定肝組織中的NF-κ表達(dá)。 結(jié)果： I/R組大鼠肝臟經(jīng)缺血25min，分別再灌注2、3、4小時(shí)后，血清肝酶學(xué)指標(biāo)(AST、ALT、LDH)和肝臟的組織形態(tài)學(xué)都顯示較S組

4、大鼠有明顯的肝臟損傷。同時(shí)，肝組織W／D比值和TNF-α的陽性表達(dá)比，及NF-kB在免疫組化和wcstem blot免疫印跡中的表達(dá)亦均明顯高于S組(p<0.01)。IPC組和PDTC組大鼠分別經(jīng)IPC(肝左、中葉為經(jīng)典的IPC，肝右葉則為HPC)和注射PDTC的預(yù)處理后，再行缺血再灌注2、3、4小時(shí)，顯示肝損傷程度明顯輕于I／R組，同時(shí)左右側(cè)肝組織的W／D比值，TNF-α和NF-kB在兩種檢測(cè)方法中的表達(dá)亦均明顯低于I／R組(p<0.

5、05)。再灌注后左右肝三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的組間比較，以上指標(biāo)在數(shù)值上雖然以再灌注3小時(shí)組為高，但均未顯示有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。IPC組左右肝的比較，以上各項(xiàng)指標(biāo)雖然在數(shù)值上顯示左肝略低于右肝，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上兩者未見有顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1，NF-kB在肝I／R損傷的發(fā)生機(jī)制中是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路上的重要轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)I／R損傷的炎癥反應(yīng)起介導(dǎo)作用； 2，NF-kB的活化被抑制是肝IPC保護(hù)機(jī)制中