利奈唑胺體外誘導(dǎo)金黃色葡萄球菌耐藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、耐藥菌感染正在全球蔓延，感染率和死亡率正在逐年上升，特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA）、耐萬古霉素腸球菌（Vancomycin-resistantEnterococci，VRE）的出現(xiàn)和流行，嚴(yán)重威脅著人類的身體健康。根據(jù)中國CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)網(wǎng)數(shù)據(jù)，近幾年MRSA分離的比例均維持在50％以上。傳播廣泛、多重耐藥使得MRSA的治療變得更加

2、困難和復(fù)雜，已成為全球性公共衛(wèi)生問題。
　　 利奈唑胺是第一個(gè)獲得美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)用于臨床的噁唑烷酮類抗生素，并且是目前此類中唯一應(yīng)用于臨床的藥物，獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗菌作用機(jī)制為對(duì)抗各種難治性耐藥菌帶來了希望。利奈唑胺對(duì)大多數(shù)的革蘭陽性致病菌表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗菌活性，如MRSA、VRE、多重耐藥肺炎鏈球菌等。然而該藥應(yīng)用臨床后不久便在多個(gè)國家的臨床菌株中出現(xiàn)了耐藥性，因此，研究利奈唑胺的耐藥機(jī)制對(duì)臨床醫(yī)師了解和掌握

3、利奈唑胺耐藥菌形成的原因和機(jī)制，進(jìn)而合理使用該藥具有重大意義。
　　 研究目的:本實(shí)驗(yàn)在體外誘導(dǎo)金黃色葡萄球菌對(duì)利奈唑胺耐藥，建立誘導(dǎo)耐藥株模型，初步探討其耐藥性的形成機(jī)制，對(duì)比觀察并分析誘導(dǎo)前后菌株的適應(yīng)性及對(duì)其他抗生素的耐藥性變化，為今后更深入、全面的耐藥機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
　　 材料與方法:收集天津市某三級(jí)甲等醫(yī)院門診及住院患者的血、痰、胸腹腔引流液、膿液及眼、耳、鼻等部位分泌物臨床標(biāo)本中分離的金葡菌。細(xì)菌鑒定采用

4、API葡萄球菌鑒定系統(tǒng)及金黃色葡萄球菌乳膠凝集法，應(yīng)用mecA基因擴(kuò)增法篩選MRSA菌株;選取9株對(duì)利奈唑胺敏感性較低的臨床分離金葡菌，其中5株為甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(Methicillin-susceptibleStaphylococcusaureus，MSSA)，4株為MRSA，以金葡菌ATCC25923作為質(zhì)控菌株。采用利奈唑胺濃度2倍遞增的方法對(duì)9株臨床分離金葡菌(5株MSSA，4株MRSA)和質(zhì)控菌株ATCC25923進(jìn)

5、行體外誘導(dǎo);采用PCR基因技術(shù)擴(kuò)增誘導(dǎo)前后金葡菌23SrRNA的Ⅴ區(qū)基因并測(cè)序、Blast比對(duì)，分析突變與耐藥性的關(guān)系;比較誘導(dǎo)前后金葡菌的適應(yīng)性以及對(duì)抗菌藥物的耐藥性變化。
　　 結(jié)果:經(jīng)過利奈唑胺長時(shí)間體外誘導(dǎo)后，10株實(shí)驗(yàn)菌株中有9株誘導(dǎo)出利奈唑胺耐藥性，且耐藥性穩(wěn)定。其中，Sa10經(jīng)誘導(dǎo)后MIC值最高，達(dá)到128mg/L，與其親代敏感株相比，MIC值增加了64倍，質(zhì)控菌ATCC25923(Sa1)經(jīng)誘導(dǎo)后MIC值也增高了

6、16倍(64mg/L)，Sa8誘導(dǎo)后MIC值最低(8mg/L)，其余誘導(dǎo)后金葡菌的MIC值均16mg/L。擴(kuò)增金葡菌23SrRNA的V區(qū)基因片段，測(cè)序發(fā)現(xiàn)有5株耐藥菌發(fā)生了突變，分別為:誘導(dǎo)后菌株ATCC25923(S1,A2531T)、S3(A2289G)、S5(A2289G)、S9(C2691T、A2289G)、S10(C2474A、A2289G)，且第2289位點(diǎn)的突變發(fā)生率最高(4/5)。實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)利奈唑胺耐藥后金葡菌的菌落和