維甲酸誘導(dǎo)大鼠脊髓脊膜膨出致神經(jīng)源性膀胱及其病理和蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　神經(jīng)源性膀胱是小兒泌尿外科較常見的疾病之一，我們對(duì)其發(fā)病機(jī)理和病理生理過程的了解非常有限。本研究希望利用維甲酸誘導(dǎo)大鼠胎鼠脊髓脊膜膨出，建立一種非手術(shù)的神經(jīng)源性膀胱動(dòng)物模型，為深入研究神經(jīng)源性膀胱的發(fā)生機(jī)制和治療措施打下必要的前期理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。同時(shí)獲得MMC胎鼠腰骶部脊髓、膀胱標(biāo)本，通過免疫組化方法測(cè)定GFAP、α-SMA、tubulin-β-Ⅲ和nNOS蛋白表達(dá)情況，進(jìn)一步了解脊髓的損傷程度、膀胱平滑肌及神經(jīng)纖維的

2、發(fā)育分布情況，初步探討膀胱病理改變與脊髓損害的關(guān)系。
　　方法：
　　1.誘導(dǎo)大鼠胎鼠脊髓脊膜膨出
　　健康懷孕的S-D大鼠隨機(jī)分為三組：a)E9實(shí)驗(yàn)組：不同劑量的atRA(40-70mg/kg)溶于2ml橄欖油，母鼠孕9天灌胃；b)E10實(shí)驗(yàn)組：不同劑量atRA(40-130mg/kg)溶于2ml橄欖油，母鼠孕10天灌胃；c)對(duì)照組：2ml橄欖油，母鼠孕10天灌胃。母鼠孕21天剖腹取出胚胎，觀察記錄數(shù)量及外觀情況。<

3、br>　　2.病理和相關(guān)蛋白檢測(cè)
　　atRA(120mg/kg)溶于2ml橄欖油，母鼠孕10天灌胃；空白對(duì)照母鼠同期灌胃2ml橄欖油。孕21天剖腹取出胚胎，按如下條件分組：a)MMC組，母鼠atRA暴露，胎鼠出現(xiàn)MMC，不合并其他嚴(yán)重畸形；b)RA組：母鼠atRA暴露，胎鼠外觀正常；c)OIL組(空白對(duì)照組)：母鼠無atRA暴露，胎鼠外觀正常。
　　分別取胎鼠腰骶部脊髓及膀胱組織。常規(guī)石蠟包埋、H-E染色。免疫組化三步法測(cè)

4、定GFAP、α-SMA、tubulin-β-Ⅲ和nNOS蛋白表達(dá)情況，顯微鏡觀察拍照后計(jì)算高倍鏡視野下的IOD值，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　75只孕鼠接受灌胃，胚胎總數(shù)810個(gè)，其中MMC胎鼠97只(12.0％)；死胎及吸收胎220個(gè)(27.2％)。E9實(shí)驗(yàn)組(16只)進(jìn)行了4個(gè)劑量的實(shí)驗(yàn)，獲得胚胎128個(gè)，未誘導(dǎo)出MMC胎鼠，死胎及吸收胎127個(gè)(99.2％)。E10實(shí)驗(yàn)組(56只)進(jìn)行了10個(gè)劑量的實(shí)驗(yàn)，獲得胚

5、胎637個(gè)，MMC胎鼠97只(15.2％)，死胎及吸收胎93個(gè)(15.0％)。MMC胎鼠發(fā)生率在120mg/kg時(shí)達(dá)到最高(43.0％)，死胎及吸收胎的發(fā)生率在130mg/kg時(shí)達(dá)到最高(39.5％)。對(duì)照組(3只)獲得胎鼠45只，無死胎及吸收胎，所有胎鼠外觀均正常。
　　脊髓組織水平位切片H-E染色顯示MMC組脊髓結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不同程度的異常，同時(shí)伴有椎體軟骨發(fā)育不良、體表皮膚缺損等損害；膀胱組織切片H-E染色三組的表現(xiàn)相似，MMC組

6、未觀察到明顯異常。
　　GFAP蛋白表達(dá)MMC組較另兩組增加；α-SMA蛋白表達(dá)三組間無明顯差異；tubulin-β-Ⅲ、nNOS蛋白表達(dá)MMC組均較另兩組減少；隨著皮膚缺損程度的增加，膀胱tubulin-β-Ⅲ、nNOS蛋白的表達(dá)均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　維甲酸能誘導(dǎo)大鼠胎鼠產(chǎn)生MMC，得到具有臨床和病理相似性的神經(jīng)源性膀胱非手術(shù)動(dòng)物模型；母鼠孕10天時(shí)以120mg/kg的劑量灌胃atRA，MMC胎鼠的發(fā)生率