Ⅱ型極低密度脂蛋白受體促腫瘤細(xì)胞侵襲遷移的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、極低密度脂蛋白受體(very low density lipoprotein receptor,VLDLR)屬于LDLR超家族成員,是1993年Sakai研究小組在構(gòu)建LDLR cDNA文庫(kù)時(shí)發(fā)現(xiàn)的。該基因結(jié)構(gòu)與LDLR家族其他成員非常相似,位于第9號(hào)染色體,包含19個(gè)外顯子。成熟的VLDLR由846個(gè)氨基酸殘基組成,總分子量約為135KD。由于第16號(hào)外顯子選擇性剪切的作用,全長(zhǎng)的VLDLR中O-連接糖鏈域缺失產(chǎn)生了II型VLDLR。

2、較早的研究認(rèn)為VLDLR主要通過(guò)參與介導(dǎo)甘油三酯的攝取而在脂代謝過(guò)程中發(fā)揮一定作用。
　　本研究的新穎之處在于揭示了II型VLDLR在腫瘤組織中高表達(dá),且與淋巴結(jié)、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移,病理TNM分期等臨床指標(biāo)明顯相關(guān)。此外,闡釋了II型VLDLR與腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移能力存在密切聯(lián)系,該效應(yīng)的發(fā)揮涉及Wnt/β-Catenin信號(hào)通路。此項(xiàng)研究擴(kuò)展了脂蛋白受體家族成員作為“瑞士軍刀”樣受體功能的多樣性,也將進(jìn)一步深化對(duì)II型VLDLR與腫瘤發(fā)

3、生發(fā)展相互關(guān)系的認(rèn)識(shí),為在腫瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)這一關(guān)鍵性腫瘤研究領(lǐng)域開(kāi)拓新的方向。
　　第一部分II型VLDLR在多種惡性腫瘤中的表達(dá)變化及其與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系
　　摘要
　　目的：探討II型VLDLR在腫瘤組織中的表達(dá)變化與臨床病理各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性,旨在初步闡釋II型VLDLR與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,為深入研究其影響腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為改變的潛在機(jī)制提供線索和依據(jù)。
　　方法：基于前期收集建立的臨床腫瘤標(biāo)本,運(yùn)用免疫組化

4、及蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)II型VLDLR蛋白在乳腺癌、胃癌和肺癌患者術(shù)后腫瘤組織及癌旁正常組織的表達(dá)水平,并結(jié)合病歷資料統(tǒng)計(jì)分析II型VLDLR在腫瘤組織中的表達(dá)變化與臨床病理各項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)系。同時(shí)在上述標(biāo)本中檢測(cè)分析Wnt/β-Catenin信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白β-Catenin與II型VLDLR的表達(dá)量是否具有相關(guān)性。
　　結(jié)果：1、相對(duì)于正常組織,II型VLDLR在乳腺癌、胃癌及肺癌組織中的表達(dá)均升高;2、高表達(dá)II型VLDLR與

5、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移以及TNM分期相關(guān),即在發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者腫瘤組織中II型VLDLR表達(dá)更高,提示II型VLDLR與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移存在潛在聯(lián)系;3、II型VLDLR在乳腺癌、胃癌組織中與β-Catenin及VEFG的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：II型VLDLR在腫瘤組織中的表達(dá)明顯上調(diào),其發(fā)揮促腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用與上調(diào)表達(dá)或累積胞內(nèi)的β-Catenin密切相關(guān)。
　　第二部分II型VLDLR促腫瘤細(xì)胞侵襲遷移的作用及其機(jī)制探討

6、
　　摘要
　　目的：前面的研究表明,II型VLDLR與惡性腫瘤淋巴結(jié)及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的關(guān)系密切,基于我們的發(fā)現(xiàn)和以往對(duì)Wnt/β-Catenin信號(hào)通路與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究,認(rèn)為II型VLDLR與β-Catenin在胞漿內(nèi)的積累進(jìn)而調(diào)控下游靶基因轉(zhuǎn)錄可能有關(guān)系。本研究檢測(cè)了II型VLDLR對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7及1590胞漿內(nèi)β-Catenin在mRNA和蛋白水平表達(dá)及對(duì)Wnt信號(hào)通路活化的影響。探討了II型VLDLR影

7、響腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移可能的分子機(jī)制。
　　方法：1、Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)II型VLDLR對(duì)MCF-7及1590細(xì)胞侵襲能力的影響;2、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)II型VLDLR對(duì)MCF-7及1590細(xì)胞遷移能力的影響;3、MTT檢測(cè)II型VLDLR對(duì)MCF-7及1590細(xì)胞增殖能力的影響;4、Realtime-PCR檢測(cè)II型VLDLR對(duì)β-Catenin mRNA表達(dá)的影響;5、Western blot檢測(cè)II型VLDLR對(duì)β-

8、Catenin表達(dá)、降解以及β-Catenin磷酸化的影響;6、報(bào)告基因檢測(cè)II型VLDLR對(duì)Wnt/β-Catenin活化程度的影響。
　　結(jié)果：1、相對(duì)于侵襲遷移能力較弱MCF-7細(xì)胞,高侵襲性高轉(zhuǎn)移性的1590細(xì)胞系中II型VLDLR表達(dá)明顯升高;2、在上述細(xì)胞中過(guò)表達(dá)II型VLDLR后,兩種細(xì)胞系的侵襲、遷移及增殖能力均有提高;3、過(guò)表達(dá)II型VLDLR對(duì)β-Catenin mRNA表達(dá)無(wú)明顯影響;4、II型VLDLR上調(diào)

9、胞漿內(nèi)β-Catenin的表達(dá),抑制了β-Catenin的磷酸化,增強(qiáng)了β-Catenin的穩(wěn)定性;5、II型VLDLR具有放大Wnt3a對(duì)Wnt/β-Catenin激活效應(yīng)的作用;6、抑制Wnt/β-Catenin信號(hào)通路能有效抑制過(guò)表達(dá)II型VLDLR對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響。
　　結(jié)論II型VLDLR受體通過(guò)增強(qiáng)了胞漿內(nèi)β-Catenin的穩(wěn)定性,增強(qiáng)了Wnt/β-Catenin信號(hào)通路活化的程度從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的侵