甘藍(lán)型油菜隱性細(xì)胞核不育恢復(fù)基因BnMs4的精細(xì)定位.pdf

1、自陳鳳祥報(bào)道隱性細(xì)胞核雄性不育材料9012A以來(lái)，大家一直認(rèn)為其育性是由兩對(duì)隱性重疊基因(Bnms3ms3、Bnms4ms4)和一對(duì)上位抑制基因(Bnrfrf)共同作用的遺傳模式，上位基因純合隱性時(shí)(Bnrfrf)可以抑制Bnms3ms3ms4ms4所控制的不育，使植株表現(xiàn)為雄性可育。但是俎峰等利用分子標(biāo)記共用和回交自交實(shí)驗(yàn)，以及連鎖不平衡分析，認(rèn)為控制736512AB材料(與9012A遺傳模式相同)育性的BnMs4和BnRf很可能是復(fù)

2、等位基因。董發(fā)明等也通過(guò)9012AB及其臨保系T45，與來(lái)源不同的自交系和常規(guī)品種進(jìn)行雜交、測(cè)交實(shí)驗(yàn)，并對(duì)其后代進(jìn)行遺傳分析，在此基礎(chǔ)上提出了9012AB的遺傳新模式。二者得出一個(gè)共同的結(jié)論，認(rèn)為9012AB的育性只受2對(duì)核基因(BnMs3和Bnrf)控制，其中Bn Ms3位點(diǎn)存在2個(gè)等位基因，可育基因BnMs3和隱性不育基因Bnms3，而B(niǎo)nrf位點(diǎn)存在3個(gè)復(fù)等位基因，可育基因BnMs，不育基因Bnms和隱性上位基因Bnrf。究竟是緊

3、密連鎖還是復(fù)等位？這兩對(duì)基因間的關(guān)系還有待深入證明研究。因此BnMs4和BnRf的精細(xì)定位及克隆，對(duì)進(jìn)一步理解此核不育材料的分子機(jī)理，以及分子標(biāo)記輔助選擇都具有十分重要的意義。本實(shí)驗(yàn)以736512AB為材料，采取圖位克隆的方法，利用各種生物信息開(kāi)發(fā)更近的分子標(biāo)記，對(duì)甘藍(lán)型油菜隱性核不育恢復(fù)基因BnMs4進(jìn)行精細(xì)定位以及候選區(qū)段的確定，取得的主要結(jié)果如下：
　　 1)前人對(duì)BnMs4初定位結(jié)果為兩側(cè)最短遺傳圖距分別為1.0cM和2

4、.4cM，在此基礎(chǔ)上本實(shí)驗(yàn)開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)了一批與BnMs4更近的分子標(biāo)記，CL14，CL15，CL16，H3-2，ssr103YH，DD29，34BJ4，其中ssr103YH和CL14分別將兩側(cè)最短遺傳距離縮短到0.20cM和0.10cM。
　　 2)含有白菜和埃塞俄比亞芥菜亞基因組優(yōu)勢(shì)的749材料對(duì)736512AB進(jìn)行輪回改良，利用一個(gè)改良后的分離群體(含6060個(gè)單株)，將BnMs4定位到兩側(cè)分別為1.57cM和0.10cM的遺傳

5、距離。
　　 3)利用一個(gè)近等基因系736512AB的多代兄妹交群體(含1993個(gè)單株)，將BnMs4定位到兩側(cè)分別為0.20cM和0.15cM的遺傳距離。
　　 4)比較測(cè)序發(fā)現(xiàn)Bnms4在非編碼序列的一個(gè)SSR位點(diǎn)發(fā)生了6個(gè)堿基的缺失突變，并且BnMs4和Bnms4在cDNA水平存在大量SNP差異。
　　 5)篩選BAC文庫(kù)進(jìn)行shotgun測(cè)序，獲得部分BnMs4附近的基因信息。
　　 6)利用兩側(cè)