甘藍型油菜隱性細胞核不育恢復基因BnMs4的精細定位.pdf

1、自陳鳳祥報道隱性細胞核雄性不育材料9012A以來，大家一直認為其育性是由兩對隱性重疊基因(Bnms3ms3、Bnms4ms4)和一對上位抑制基因(Bnrfrf)共同作用的遺傳模式，上位基因純合隱性時(Bnrfrf)可以抑制Bnms3ms3ms4ms4所控制的不育，使植株表現(xiàn)為雄性可育。但是俎峰等利用分子標記共用和回交自交實驗，以及連鎖不平衡分析，認為控制736512AB材料(與9012A遺傳模式相同)育性的BnMs4和BnRf很可能是復

2、等位基因。董發(fā)明等也通過9012AB及其臨保系T45，與來源不同的自交系和常規(guī)品種進行雜交、測交實驗，并對其后代進行遺傳分析，在此基礎上提出了9012AB的遺傳新模式。二者得出一個共同的結論，認為9012AB的育性只受2對核基因(BnMs3和Bnrf)控制，其中Bn Ms3位點存在2個等位基因，可育基因BnMs3和隱性不育基因Bnms3，而Bnrf位點存在3個復等位基因，可育基因BnMs，不育基因Bnms和隱性上位基因Bnrf。究竟是緊

3、密連鎖還是復等位？這兩對基因間的關系還有待深入證明研究。因此BnMs4和BnRf的精細定位及克隆，對進一步理解此核不育材料的分子機理，以及分子標記輔助選擇都具有十分重要的意義。本實驗以736512AB為材料，采取圖位克隆的方法，利用各種生物信息開發(fā)更近的分子標記，對甘藍型油菜隱性核不育恢復基因BnMs4進行精細定位以及候選區(qū)段的確定，取得的主要結果如下：
　　 1)前人對BnMs4初定位結果為兩側最短遺傳圖距分別為1.0cM和2

4、.4cM，在此基礎上本實驗開發(fā)設計了一批與BnMs4更近的分子標記，CL14，CL15，CL16，H3-2，ssr103YH，DD29，34BJ4，其中ssr103YH和CL14分別將兩側最短遺傳距離縮短到0.20cM和0.10cM。
　　 2)含有白菜和埃塞俄比亞芥菜亞基因組優(yōu)勢的749材料對736512AB進行輪回改良，利用一個改良后的分離群體(含6060個單株)，將BnMs4定位到兩側分別為1.57cM和0.10cM的遺傳

5、距離。
　　 3)利用一個近等基因系736512AB的多代兄妹交群體(含1993個單株)，將BnMs4定位到兩側分別為0.20cM和0.15cM的遺傳距離。
　　 4)比較測序發(fā)現(xiàn)Bnms4在非編碼序列的一個SSR位點發(fā)生了6個堿基的缺失突變，并且BnMs4和Bnms4在cDNA水平存在大量SNP差異。
　　 5)篩選BAC文庫進行shotgun測序，獲得部分BnMs4附近的基因信息。
　　 6)利用兩側