G蛋白偶聯(lián)受體激酶在膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用及白芍總苷和芍藥苷對其的影響.pdf

1、目的：觀察膠原性關(guān)節(jié)炎(collagen-induced arthritis，CIA)大鼠炎癥過程中滑膜組織G蛋白偶聯(lián)受體激酶(G-protein-coupled receptor kinases,GRKs)的表達(dá)情況及白芍總苷(total glucosides of paeony,TGP)對其的影響;明確GRKs在CIA大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)中的表達(dá)情況及TGP中有效單

2、體成分芍藥苷(paeoniflorin，Pae)對其的影響。從滑膜細(xì)胞G蛋白偶聯(lián)信號途徑，研究GRK2在FLS的信號調(diào)節(jié)中作用及Pae治療大鼠CIA的可能的分子機(jī)制。 方法：大鼠足趾、尾根部、背部皮內(nèi)多點注射雞Ⅱ型膠原(chicken type Ⅱcollagen，CCII)乳劑制備CIA模型，TGP(25、50、100 mg·kg-1·d-1)灌胃給藥(intragastricadministration，ig)(d14～d2

3、8)，觀察大鼠全身狀況及足爪腫脹度，光學(xué)顯微鏡觀察關(guān)節(jié)病理變化；Western blot檢測GRKs水平。組織塊法培養(yǎng)大鼠關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞，微孔生物發(fā)光法檢測FLS PKA活性，放免法檢測FIS cAMP水平。 結(jié)果： 1.CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織GRKs的表達(dá)及TGP對其的影響CIA大鼠加強免疫注射后28天左右炎癥反應(yīng)達(dá)到高峰，光鏡下可見滑膜組織中滑膜細(xì)胞增生明顯，層次增多，排列紊亂，滑膜下層纖維組織增生，血管擴(kuò)張、充血，炎

4、性細(xì)胞浸潤及血管翳形成，軟骨中炎性細(xì)胞浸潤，破壞軟骨組織。Westernblot發(fā)現(xiàn)CIA大鼠滑膜組織中GRK2、GRKs、GRK6的表達(dá)較正常組明顯升高，致炎后28天GRK2、GRK5、GRK6的表達(dá)達(dá)到高峰；46天后關(guān)節(jié)腫脹、炎癥逐漸減退，GRK2、GRK5、GRK6的高表達(dá)也開始下降。TGP(25、50、100 mg·kg-1)可明顯減輕CIA大鼠的足爪腫脹度，改善其多發(fā)性關(guān)節(jié)炎癥狀，可不同程度改善以上病理變化。TGP(25、50

5、、100 mg·kg-1)可以降低CIA大鼠滑膜組織GRKs、GRK6的高表達(dá)水平；TGP(100 mg.kg-1)給藥后CIA大鼠滑膜組織GRK2的表達(dá)水平明顯降低。 2.GRKs在CIA大鼠滑膜細(xì)胞中的表達(dá)及Pae對其的影響CIA大鼠滑膜細(xì)胞GRK2、GRK5、GRK6表達(dá)水平升高，Pae(10-5、10-6、10-7、10-8moI·L-1)可以不同程度的降低CIA大鼠滑膜細(xì)胞GRK2、GRK5、GRK6的表達(dá)。 3.GR

6、K2與G蛋白·AC-cAMP信號通路的關(guān)系及Pae對其的影響加入GRK2抑制劑(5-甲基［2-(5-硝基-2-呋喃基)乙烯基］-2-糠酸酯,C12H9NO6)后，滑膜細(xì)胞cAMP的水平和PKA的活性升高；Pae(10-5、10-6、10-7、10-8mol·L-1)可以降低GRK2抑制劑引起的滑膜細(xì)胞cAMP水平的升高，Pae(10-5、10-6mol·L-1)可以降低GRK2抑制劑引起的滑膜細(xì)胞PKA活性的升高。 結(jié)論：

7、 1.CIA炎癥導(dǎo)致關(guān)節(jié)滑膜組織和滑膜細(xì)胞GRK2、GRK5、GRK6表達(dá)水平的上調(diào)；GRKs是CIA滑膜炎癥、滑膜細(xì)胞異常增殖的重要分子。 2.TGP對大鼠CIA多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)局部腫脹及病理形態(tài)等具有明顯的改善作用；TGP、Pae可以下調(diào)CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織和滑膜細(xì)胞GRKs的高表達(dá)；而且Pae可以糾正GRK2抑制劑引起的CIA大鼠滑膜細(xì)胞脫敏障礙，恢復(fù)G蛋白-AC-cAMP信號通路的正常轉(zhuǎn)導(dǎo)。提示TGP、Pae下調(diào)G