G蛋白偶聯(lián)受體激酶在膠原性關節(jié)炎大鼠滑膜細胞信號轉導中的作用及白芍總苷和芍藥苷對其的影響.pdf

1、目的：觀察膠原性關節(jié)炎(collagen-induced arthritis，CIA)大鼠炎癥過程中滑膜組織G蛋白偶聯(lián)受體激酶(G-protein-coupled receptor kinases,GRKs)的表達情況及白芍總苷(total glucosides of paeony,TGP)對其的影響;明確GRKs在CIA大鼠成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)中的表達情況及TGP中有效單

2、體成分芍藥苷(paeoniflorin，Pae)對其的影響。從滑膜細胞G蛋白偶聯(lián)信號途徑，研究GRK2在FLS的信號調節(jié)中作用及Pae治療大鼠CIA的可能的分子機制。 方法：大鼠足趾、尾根部、背部皮內多點注射雞Ⅱ型膠原(chicken type Ⅱcollagen，CCII)乳劑制備CIA模型，TGP(25、50、100 mg·kg-1·d-1)灌胃給藥(intragastricadministration，ig)(d14～d2

3、8)，觀察大鼠全身狀況及足爪腫脹度，光學顯微鏡觀察關節(jié)病理變化；Western blot檢測GRKs水平。組織塊法培養(yǎng)大鼠關節(jié)滑膜細胞，微孔生物發(fā)光法檢測FLS PKA活性，放免法檢測FIS cAMP水平。 結果： 1.CIA大鼠關節(jié)滑膜組織GRKs的表達及TGP對其的影響CIA大鼠加強免疫注射后28天左右炎癥反應達到高峰，光鏡下可見滑膜組織中滑膜細胞增生明顯，層次增多，排列紊亂，滑膜下層纖維組織增生，血管擴張、充血，炎

4、性細胞浸潤及血管翳形成，軟骨中炎性細胞浸潤，破壞軟骨組織。Westernblot發(fā)現(xiàn)CIA大鼠滑膜組織中GRK2、GRKs、GRK6的表達較正常組明顯升高，致炎后28天GRK2、GRK5、GRK6的表達達到高峰；46天后關節(jié)腫脹、炎癥逐漸減退，GRK2、GRK5、GRK6的高表達也開始下降。TGP(25、50、100 mg·kg-1)可明顯減輕CIA大鼠的足爪腫脹度，改善其多發(fā)性關節(jié)炎癥狀，可不同程度改善以上病理變化。TGP(25、50

5、、100 mg·kg-1)可以降低CIA大鼠滑膜組織GRKs、GRK6的高表達水平；TGP(100 mg.kg-1)給藥后CIA大鼠滑膜組織GRK2的表達水平明顯降低。 2.GRKs在CIA大鼠滑膜細胞中的表達及Pae對其的影響CIA大鼠滑膜細胞GRK2、GRK5、GRK6表達水平升高，Pae(10-5、10-6、10-7、10-8moI·L-1)可以不同程度的降低CIA大鼠滑膜細胞GRK2、GRK5、GRK6的表達。 3.GR

6、K2與G蛋白·AC-cAMP信號通路的關系及Pae對其的影響加入GRK2抑制劑(5-甲基［2-(5-硝基-2-呋喃基)乙烯基］-2-糠酸酯,C12H9NO6)后，滑膜細胞cAMP的水平和PKA的活性升高；Pae(10-5、10-6、10-7、10-8mol·L-1)可以降低GRK2抑制劑引起的滑膜細胞cAMP水平的升高，Pae(10-5、10-6mol·L-1)可以降低GRK2抑制劑引起的滑膜細胞PKA活性的升高。 結論：

7、 1.CIA炎癥導致關節(jié)滑膜組織和滑膜細胞GRK2、GRK5、GRK6表達水平的上調；GRKs是CIA滑膜炎癥、滑膜細胞異常增殖的重要分子。 2.TGP對大鼠CIA多發(fā)性關節(jié)炎、關節(jié)局部腫脹及病理形態(tài)等具有明顯的改善作用；TGP、Pae可以下調CIA大鼠關節(jié)滑膜組織和滑膜細胞GRKs的高表達；而且Pae可以糾正GRK2抑制劑引起的CIA大鼠滑膜細胞脫敏障礙，恢復G蛋白-AC-cAMP信號通路的正常轉導。提示TGP、Pae下調G