白芍總苷對人骨關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞增殖的影響及對Wnt信號通路調控的研究.pdf

1、目的：觀察人骨關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞（human fibroblast-like synoviocytes-osteoarthritis，HFLS-OA）體外培養(yǎng)時生長增殖的情況及細胞特征，對兩種原代培養(yǎng)方法（組織塊培養(yǎng)法和酶消化法）進行比較，并進行細胞鑒定；觀察不同濃度的白芍總苷（total glucosides of paeony， TGP）對HFLS-OA增殖的影響；觀察并比較不同濃度梯度的TGP對Wnt信號通路的影響。
　

2、　方法：取新鮮骨關節(jié)炎患者滑膜組織，分別使用組織塊培養(yǎng)法、酶消化法進行原代HFLS-OA培養(yǎng)；分離培養(yǎng)FLS原代細胞至P3代，運用流式細胞儀進行鑒定后備用；不同濃度（312.5ug/ml；625ug/ml；1250ug/ml；2500ug/ml；5000ug/ml）的TGP干預HFLS-OA24h后，用CCK8法測定TGP對HFLS-OA生長的抑制作用；不同濃度（625ug/ml；1250ug/ml；2500ug/ml；5000ug/m

3、l）的TGP與 HFLS-OA共同孵育24h后，運用Western-blot法分析不同濃度干預后的 HFLS-OA中β-catenin、DKK-1、sFRP-1蛋白表達水平的影響。
　　結果：與酶消化法相比，組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)的FLS生長情況良好，數(shù)量更多、形態(tài)更為一致； HFLS-OA P0代細胞形態(tài)不一，參雜各種細胞，隨著培養(yǎng)時間的延長及傳代的影響，至P3代可獲得純化的FLS；流式細胞儀檢測示經培養(yǎng)獲得的細胞95％以上呈Vime

4、ntin陽性、CD68陰性，符合FLS的特點；隨著 TGP濃度的增加（625ug/ml；1250ug/ml；2500ug/ml；5000ug/ml），OD值逐漸降低，有統(tǒng)計學意義（p=0.016，p<0.001，p<0.001， p<0.001），低濃度 TGP（312.5ug/ml）組與對照組 OD值無明顯差異（p=0.100）；隨著TGP濃度的改變（625ug/ml；1250ug/ml；2500ug/ml；5000ug/ml），β-