含CDglyES的雙功能融合基因的重組腺病毒對(duì)放療增敏作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文含CDglyES的雙功能融合基因的重組腺病毒對(duì)放療增敏作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名：孫健申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：朱曉代20030601顧j_研究生學(xué)位論文含CDglyES的雙功能融合基因的重組腺病毒對(duì)放療增敏作用的實(shí)驗(yàn)研究摘要本研究首先用PCR法從課題組構(gòu)建的含cD基因的重組腺病毒(rAd—CD)中擴(kuò)增出cD基因，將其插入腺病毒穿梭質(zhì)粒(pAdTrackCMV)，而后從含Es基因的分泌型表達(dá)質(zhì)粒DEZZ—1

2、8一ES中擴(kuò)增出glyES基因，將兩者融合構(gòu)建成含CDglyES融合基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdTrackCMV—CD。然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BJ5183，構(gòu)建出重組腺病毒質(zhì)粒pAdTrackCMV—CDglyES，用卡那霉素篩選重組質(zhì)粒，用限制性內(nèi)切酶酶切、PCR擴(kuò)增和測(cè)序?qū)Σ迦牖蜻M(jìn)行鑒定。然后經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行包裝和擴(kuò)增，借助報(bào)告基因監(jiān)控和篩選重組腺病毒。采用氯化銫密度梯度離心純化病毒，用TCID。。法滴定其濃度。為了證實(shí)融合

3、基因CDglyES具有雙重活性，進(jìn)行了初步的體外抑瘤試驗(yàn)。將純化重組腺病毒稀釋成l10”TCID。／L，分別感染肝癌細(xì)胞株SMMC一7721和宮頸癌細(xì)胞株Hela24小時(shí)，給予前藥5FC，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率；并與對(duì)照重組病毒rAdCD和rAdLacZ的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率進(jìn)行比較。結(jié)果顯示融合基因系統(tǒng)對(duì)SMMC7721細(xì)胞的抑制率達(dá)782％，與rAd—LacZ／5一FC(522％)系統(tǒng)比較有顯著性差異，PO5。這一