重組人p53腺病毒對(duì)人胃癌和腸癌細(xì)胞的作用及其與熱療對(duì)放化療的增敏作用.pdf

1、目的：1.研究重組人p53腺病毒(Adp53)對(duì)人胃癌細(xì)胞的作用及其增加化療、熱療和放療敏感性的作用。2.探討熱療、化療、放療、熱化療、熱放療及熱放化療對(duì)人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤P53、bcl—2、bax表達(dá)的影響。 材料與方法：以重組人p53腺病毒感染胃癌細(xì)胞BGC-823，用免疫組化法和Westernblot法檢測(cè)p53蛋白在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)；MTT法測(cè)定重組人p53腺病毒單獨(dú)及聯(lián)合順鉑用藥的不同濃度處理細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率，流式細(xì)胞

2、儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布和凋亡率。將胃癌細(xì)胞種植于裸鼠右下肢，于腫瘤內(nèi)注射Adp53懸液后48h，行43℃，0.5h加溫，另外一組于腫瘤內(nèi)注射Adp53后照射6Gy，以腫瘤相對(duì)體積增長(zhǎng)曲線(xiàn)觀察腫瘤抑制情況。將人類(lèi)結(jié)腸癌細(xì)胞株(HT29)移植于雙側(cè)裸鼠后肢。于實(shí)驗(yàn)室模擬熱療條件(43℃，60分鐘)，參照人類(lèi)大腸癌臨床化療方案(MMC)，計(jì)算出實(shí)際用量，參照人類(lèi)大腸癌臨床放療方案，計(jì)算出實(shí)際射線(xiàn)量。實(shí)驗(yàn)共分6組，即熱療組、化療組、放療組、熱化組、

3、熱放組及熱放化組。于治療前、治療后2、4、8、12、24、48、72小時(shí)，處死裸鼠，取腫瘤組織備用。利用免疫組化染色(S—P方法)觀察腫瘤細(xì)胞膜、細(xì)胞漿及細(xì)胞核bcl-2、bax和P53表達(dá)的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果： 1.重組人p53腺病毒感染BGC-82348h，p53蛋白在BGC-823中高表達(dá)，并產(chǎn)生G2/M期阻滯和細(xì)胞凋亡。Adp53基因的作用不依賴(lài)胃癌細(xì)胞內(nèi)在的p53狀態(tài)。 2.重組人p53腺病毒聯(lián)合順鉑用

4、藥增加順鉑的敏感性。 3.加溫實(shí)驗(yàn)顯示：Adp53對(duì)W細(xì)胞腫瘤43℃0.5h加溫的熱增敏比為1.7，而對(duì)M細(xì)胞腫瘤為1.6。 4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Adp53對(duì)w細(xì)胞腫瘤6Gy照射的抑瘤率比值為1141，而對(duì)M細(xì)胞腫瘤為1191。 5.6種治療方法均能不同程度下調(diào)P53、bcl-2，上調(diào)bax基因的表達(dá)；熱療聯(lián)合應(yīng)用化療和(或)放療對(duì)人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤凋亡相關(guān)基因表達(dá)的改變更為顯著。 結(jié)論： 重組

5、人p53腺病毒誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡，且這種作用不依賴(lài)于細(xì)胞內(nèi)在p53狀況。 重組人p53腺病毒增加胃癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，為p53基因治療與胃癌化療臨床結(jié)合提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 重組人p53腺病毒提高了人胃癌細(xì)胞的熱敏感性，為p53基因治療與熱療結(jié)合提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 重組人p53腺病毒提高人胃癌細(xì)胞的放射敏感性，為p53基因治療與放療療結(jié)合提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 熱療可能通過(guò)增強(qiáng)放化療對(duì)凋亡相關(guān)基因