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文檔簡介
1、該研究是在課題組前期研究的基礎(chǔ)上,選用了胞嘧淀脫氨酶(CD)自殺基因和內(nèi)皮抑素(ES)基因.CD基因在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的胞嘧啶脫氨酶將5-FC轉(zhuǎn)化為5-FU,直接局部破壞瘤細(xì)胞;而ES基因在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的內(nèi)皮抑素通過抑制腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的形成,使之不能形成新生血管,阻斷瘤細(xì)胞的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng),同時(shí)也阻斷了腫瘤的遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移,達(dá)到間接抑瘤作用.該研究將CD和ES基因融合,并插入腺病毒載體構(gòu)建成具有直、間接雙重抑瘤作用的重組腺病毒.該研
2、究首先用PCR方法從課題組構(gòu)建的含 CD基因的重組腺病毒(rAd-CD)中擴(kuò)增出帶有特異插入酶切點(diǎn)的CD基因,將其插入腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV中構(gòu)建成pAdTrackCMV-CD,進(jìn)行酶切及PCR鑒定.然后用合成的帶有甘氨酸linker的ES基因上、下游引物從前期構(gòu)建的含ES基因的原核細(xì)胞分泌型表達(dá)質(zhì)粒(pEZZ-18-ES)中擴(kuò)增出glyES基因片段,再插入到pAdTrackCMV-CD中構(gòu)建成含CDglyES融合基因的
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