氯吡格雷對(duì)BMSCs移植治療大鼠腦缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：
　　制備大鼠大腦中動(dòng)脈缺血（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型后，分別采用單獨(dú)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs）移植及單獨(dú)氯吡格雷治療與氯吡格雷聯(lián)合BMSCs移植治療，觀察比較神經(jīng)功能評(píng)分、腦組織梗死面積及Bcl-2、Bax因子表達(dá)水平變化，探討氯吡格雷對(duì)BMSCs移植治療大鼠腦缺血再灌注損傷是否有協(xié)同作用及可能機(jī)制。
　　

2、方法：
　　選取200g左右SD大鼠處死后取其長(zhǎng)骨，采用全骨髓培養(yǎng)法體外培養(yǎng)大鼠BMCSs，選擇3-5代細(xì)胞用PBS緩沖液稀釋并定容制成2×106/ml細(xì)胞混懸液備用。線栓法制作大鼠MCAO模型若干，將到達(dá)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的大鼠模型隨機(jī)分為模型對(duì)照組（B組，n=12）、氯吡格雷組（C組，n=12）、單獨(dú)BMCSs移植組(D組，n=12)及氯吡格雷聯(lián)合 BMCSs移植組(E組，n=12)，另將部分大鼠只切開皮膚分離至翼腭動(dòng)脈后即縫合，為假手

3、術(shù)組（A組，n=12）。在大鼠MCAO模型制作成功后24小時(shí)，D及E組選擇尾靜脈途徑給予已定容的細(xì)胞混懸液1ml/每只異體移植，C及E組大鼠給予氯吡格雷25mg/kg灌胃并持續(xù)灌胃至處死共14天，A組不做任何處理。造模成功后24小時(shí)及治療14天時(shí)給大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，并在14天處死大鼠，取其腦組織行HE染色、TTC法測(cè)腦梗死面積及Bcl-2、Bax蛋白免疫組化檢測(cè)等進(jìn)一步處理。
　　結(jié)果：
　　1、大鼠神經(jīng)功能評(píng)分結(jié)果表明

4、，B組、C組、D組及E組經(jīng)干預(yù)后評(píng)分分別為3.50±0.67、2.25±0.62、2.00±0.66、1.75±0.62((x)±s，分)，除B組外，其他組別前后比較均有顯著性差異（P<0.05），提示三種干預(yù)方式均能促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)，其中各組間兩兩比較均有顯著性差異，提示 D組優(yōu)于 C組，E組效果最好（P<0.05）。
　　2.TTC法測(cè)量腦梗死體積，B組、C組、D組及 E組依次為209.64±6.52、138.58±4.5

5、1、111.35±4.53、77.13±3.70((x)±s，mm3)。各組間兩兩比較，差異均有顯著性意義(P<0.05)，E組梗死面積最小。
　　3.Bcl-2免疫組化結(jié)果顯示A組、B組、C組、D組及E組分別為8.42±1.03，14.07±1.25，26.03±2.36，32.74±2.35，43.72±3.14（(x)±s，個(gè)），A組為正常組，余四組E組陽性細(xì)胞數(shù)量最多，D組較C組細(xì)胞數(shù)量增加，B組細(xì)胞數(shù)最少。
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6、.Bax免疫組化結(jié)果顯示A組、B組、C組、D組及E組分別為7.01±0.35，39.84±2.09，29.92±1.89，21.17±1.71，11.36±1.56（(x)±s，個(gè)），各組兩兩比較均有顯著性差異(P<0.05)，其中A組為正常組，余四組 E組陽性細(xì)胞數(shù)量最少，D組較C組細(xì)胞數(shù)量減少，B組細(xì)胞數(shù)最多。
　　結(jié)論：
　　1、氯吡格雷和BMSCs移植聯(lián)合治療腦缺血再灌注損傷的療效優(yōu)于單氯吡格雷或單BMSCs移植治療