脂肪組織基質血管組分治療大鼠急性心肌梗死的實驗研究.pdf

1、本研究分為兩個部分： 第一部分: 脂肪組織基質血管組分的分離與培養(yǎng) 目的： 從大鼠脂肪組織中分離、培養(yǎng)具干細胞標志的基質血管組分(stromal vascular fraction，SVF)細胞，為干細胞的研究和應用尋求更便捷的來源。 方法： 采用I型膠原酶消化分離SD大鼠皮下脂肪組織，離心后取沉淀層細胞，貼壁培養(yǎng)。免疫熒光法檢測CD31、CD34陽性表達。 結果： 第2代源于脂肪

2、組織的基質血管組分，免疫熒光顯示CD31陰性、CD34陽性。 結論： 大鼠脂肪組織中可分離出含有具干細胞標志的SVF。 第二部分：熒光標記的脂肪組織基質血管組分移植對大鼠急性心肌梗死的治療觀察 目的： 用帶GFP的慢病毒感染SVF后，移植到大鼠急性心梗部位，觀察其在心肌組織內存活、分布情況及對大鼠心肌結構和功能的影響。 方法： 通過結扎冠狀動脈左前降支制作SD大鼠急性心肌梗死模型。

3、隨機將24只大鼠分為假手術組、心梗對照組和SVF移植組，每組8只。建模1h后，假手術組和心梗對照組心外膜下注射磷酸鹽緩沖液(PBS)各100μl，SVF移植組同法注射SVF 100μl(細胞數(shù)1×106)，各組大鼠分別于手術后2周檢測心功能；取心肌缺血部位組織冰凍切片，用熒光顯微鏡觀察心肌細胞熒光信號及其分布情況；HE染色觀察各組大鼠心肌的病理改變并用計算機圖象分析測定梗死面積；免疫組化法檢測心肌組織中內皮細胞標志CD31的表達情況測定

4、血管內皮密度。 結果： 1.心功能測定顯示，+dp/dtmax：假手術組4830.74±863.36mmHg/s，心梗對照組1952.94±635.13mmHg/s，SVF移植組2742.65±659.50mmHg/s；-dp/dtmax：假手術組-4407.80±396.07mmHg/s，心梗對照組-1871.67±306.92mmHg/s，SVF移植組-2448.14±532.27 mmHg/s；LVEDP：假手術組

5、-3.14±7.95mmHg，心梗對照組38.86±17.79mmHg，SVF移植組7.17±15.58mmHg。與心梗對照組相比，SVF移植組LV+dp/dtmax、-dp/dtmax均明顯上升(P<0.05)，而LVEDP顯著降低P<0.05)；二者與假手術組相比，LV+dp/dtmax、-dp/dtmax均明顯降低(P<0.01)，LVEDP顯著升高(P<0.01)； 2.SVF移植組在缺血心肌組織局部及梗死區(qū)邊緣有GFP

6、熒光標記細胞分布； 3.與假手術組相比，心梗對照組心肌細胞明顯減少，室壁變薄，周圍纖維組織增生明顯；與心梗對照組相比，SVF移植組心肌細胞壞死減少，部分心肌得到恢復，周圍纖維化程度減輕； 4.HE染色計算機圖象分析顯示，心梗面積：假手術組1％，心梗對照組38.22％，SVF移植組34.34％。與心梗對照組相比，SVF移植組心梗面積明顯減少(P<0.05)；二者均明顯大于與假手術組(P<0.01)； 5.心肌免疫組

7、化顯示，反映血管內皮的CD31陽性細胞數(shù)：假手術組14.5個/視野，心梗對照組6.43個/視野，SVF移植組9.43個/視野。與心梗對照組相比，SVF移植組心梗區(qū)心肌組織CD31表達明顯增高(P<0.05)；二者均低于假手術組(P<0.01)。 結論： 1.帶GFP的慢病毒載體可作為移植細胞的示蹤標記； 2.慢病毒感染標記的SVF經(jīng)移植后在宿主心肌內能夠存活，并減少心梗區(qū)面積； 3.SVF可促進急性心肌梗