2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩98頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、第一部分持續(xù)驚厥后大鼠海馬神經(jīng)再生與凋亡的動態(tài)變化目的:探討驚厥持續(xù)狀態(tài)(status convulsion,SC)后大鼠海馬神經(jīng)再生與凋亡的動態(tài)變化。 方法:建立成年Wistar鼠30min SC模型,在SC后1天至56天的6個時間點上處死動物,處死前1天均腹腔注射5-溴2-脫氧尿嘧啶核苷(5-bromo 2-deoxyuridine,BrdU);采用免疫組織化學方法動態(tài)檢測BrdU、nestin的表達,確定神經(jīng)干細胞(neu

2、ral progenitor/stem cells,NPCs)增殖水平;雙重熒光染色標記nestin/TUNEL,確定新生神經(jīng)干細胞存活狀態(tài)。 結果:正常成年鼠海馬區(qū),存在少量BrdU陽性細胞;SC后1天,CA1區(qū)和齒狀回的BrdU陽性細胞即開始顯著升高,與對照組相比,BrdU陽性細胞數(shù)目于SC后第7天在CA1區(qū)達增殖高峰,28天降至正常水平;于SC后第28天在齒狀回達增殖高峰,56天降至正常水平;在SC后第7天,CA3區(qū)有大量

3、的BrdU陽性細胞。BrdU和nestin性細胞的空間分布是一致的,陽性數(shù)目無統(tǒng)計學差異;在SC后的前3天,CA1區(qū)新增殖的神經(jīng)細胞呈TUNEL,陽性;齒狀回新增殖細胞始終表現(xiàn)TUNEL陰性。結論:SC后能激活海馬自體NPCs原位增殖,并且部分新生細胞可能向海馬神經(jīng)細胞損傷區(qū)域發(fā)生遷移。 第二部分體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)干細胞的興奮性與電生理特征目的:觀察體外分離培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)干細胞(neuralprogenitor/stem c

4、ells,NPCs)的興奮性及電壓門控通道表達。 方法:無血清培養(yǎng)方法體外分離、純化孕15~16天Wistar胎鼠的海馬NPCs,nestin免疫熒光染色及血清促分化檢測NPCs的干細胞特性;以接種于多聚賴氨酸包被玻片上6~24h的第二代NPCs為研究對象,經(jīng)DiBAC4(3)染色后,用含50μM KCI的細胞外液刺激,激光共聚焦掃描顯微鏡檢測NPCs的膜興奮性;采用膜片鉗電流鉗記錄模式,記錄NPCs的自發(fā)放電和動作電位;采用電

5、壓鉗記錄模式,檢測NPCs的電壓門控離子通道表達。 結果:無血清培養(yǎng)基體外可獲得高純度的海馬NPCs,形成神經(jīng)球,可傳代培養(yǎng)3~4代;NPCs表達干細胞標記蛋白nestin,且可分化為Tuj-1免疫反應陽性的神經(jīng)元和GFAP免疫反應陽性的星形膠質細胞;接種于多聚賴氨酸包被的玻片上6~24小時的第二代NPCs仍表現(xiàn)干細胞特性;采用DiBAC4(3)染色,含高濃度鉀的細胞外液刺激后,NPCs膜電位無顯著改變;在電流鉗模式下,未能檢測

6、到NPCs的自發(fā)放電,未能誘發(fā)動作電位;在電壓鉗模式下,未記錄到NPCs的鈉電流,但記錄到到外向延遲整流鉀電流及外向瞬時鉀電流兩種鉀電流。結論:采用無血清培養(yǎng)方法,在體外成功分離大鼠海馬NPCs;大鼠海馬NPCs不易興奮,可能與其僅表達鉀電流而無鈉電流表達有關。第三部分腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對海馬神經(jīng)干細胞存活、增殖及分化的影響目的:探討腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)對海

7、馬神經(jīng)干細胞(neural progenitor/stern cells,NPCs)的存活、增殖及分化的影響。 方法:采用無血清培養(yǎng)基體外分離、純化、擴增胎鼠海馬NPCs。采用神經(jīng)球計數(shù)及神經(jīng)球直徑測定觀察BDNF對神經(jīng)干細胞有無促增殖作用,并篩選出在適當細胞密度下,促進NPCs增殖的有效濃度;采用TUNEL染色及全自動生化分析儀測定細胞培養(yǎng)上清液乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)的含量探討B(tài)DNF對

8、海馬NPCs存活的影響;采用抗-Tuj-1染色檢測NPCs分化成神經(jīng)元的百分率,同時測定分化神經(jīng)元突起的長度。 結果:體外分離培養(yǎng)的海馬NPCs表現(xiàn)為nestin免疫染色陽性,具有自我增殖能力,且能分化為神經(jīng)元和星形膠質細胞;當細胞密度為5×105個/mL時,10~200ng/mL的BDNF能顯著促進NPCs的增殖,其中40ng/mL的BDNF促增殖作用最強;40ng/mL BDNF能顯著增大神經(jīng)球直徑,顯著減少NPCs的凋亡率

9、(TUNE+/DAPI+),抑制LDH漏出。40ng/mL BDNF也能顯著促進NPCs分化為Tuj-1免疫染色陽性神經(jīng)元,且分化后神經(jīng)元的突起長度顯著長于對照組。 結論:BDNF促進海馬NPCs的存活、增殖及向神經(jīng)元方向分化。 第四部分持續(xù)驚厥后海馬內(nèi)谷氨酸的動態(tài)變化及其對神經(jīng)干細胞的作用目的:探討驚厥持續(xù)狀態(tài)(status convulsion,SC)后海馬內(nèi)谷氨酸(glutamate,Glu)含量的動態(tài)變化及其對海馬

10、神經(jīng)干細胞(neuralprogenitor/stem cells,NPCs)的體外調控作用。 方法:建立SC動物模型,在SC后1~7天內(nèi)的3個時間點處死動物,高效液相色譜法檢測海馬內(nèi)Glu含量的動態(tài)變化;體外分離、純化海馬NPCs,采用免疫熒光和Western blot檢測N-甲基-D-天門冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)的必需亞單位NR1的表達;采用Fluo-3/A

11、M鈣成像技術及細胞單通道記錄技術研究NPCs表達的NMDAR是否具有一定功能;采用TUNEL染色及全自動生化分析儀測定含不同濃度Glu和MK-801細胞培養(yǎng)上清液乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)的含量,探討NPCs上NMDAR激活是否介導神經(jīng)興奮毒性作用;采用神經(jīng)球計數(shù)及神經(jīng)球直徑測定觀察Glu對NPCs增殖的影響。結果:SC后1天,海馬內(nèi)的Glu含量即開始升高,在SC后第3天達高峰,SC后第7天降至正常水

12、平;免疫熒光和Western blot的結果均顯示NPCs表達NR1;NMDA刺激后,F(xiàn)luo-3/AM Ca2+成像結果顯示NPCs細胞內(nèi)游離Ca2+含量明顯升高,單通道細胞貼附式記錄顯示NPCs表達三種形式的電流:典型的單極矩形脈沖式發(fā)放、閃爍現(xiàn)象、爆發(fā)式開放和簇狀開放;在30μM MK-801和0~1600μM Glu共7個實驗組中,1600μM Glu組培養(yǎng)上清液中LDH顯著增高,而其他各組無差別;各組的凋亡水平無顯著差別;在3

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論