大鼠腦出血后Nrf2-ARE信號通路對灶周神經(jīng)保護作用及內(nèi)源性神經(jīng)干細胞激活的機制研究.pdf

1、目的:第一部分:近期研究發(fā)現(xiàn)Nrf2(核轉(zhuǎn)錄因子-2)/ARE（抗氧化反應(yīng)元件）信號通路在體內(nèi)具有抗氧化應(yīng)激作用、抗炎性反應(yīng)和神經(jīng)細胞保護作用。本部分研究采用萊菔硫烷激活Nrf2-ARE信號通路，維甲酸抑制Nrf2-ARE信號通路，觀察Nrf2-ARE信號通路對腦出血灶周神經(jīng)保護作用及其相關(guān)機制探索;第二部分:有文獻報道腦損傷后腦內(nèi)各部位有內(nèi)源性神經(jīng)干細胞激活和增殖，且向灶周損傷區(qū)域遷徙，但相關(guān)機制不明確。本部分研究腦出血后內(nèi)源性神經(jīng)干

2、細胞激活增殖及相關(guān)TGF-β機制的探討。
　　方法:第一部份:采用SD大鼠基底節(jié)自體動脈血注射法建立腦出血模型，分四組:單純腦出血組、萊菔硫烷(Nrf2激活劑，SFN)處理腦出血組和維甲酸(RA，Nrf2抑制劑)處理腦出血和正常對照組，觀察不同時間點大鼠神經(jīng)功能評分，取腦組織行免疫組化檢測，免疫熒光檢查及Western blot檢測Nrf2、HO-1、NF-κB表達。對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，觀察腦出血灶周神經(jīng)保護的作用。第二部分:

3、采用SD大鼠基底節(jié)自體動脈血注射法建立腦出血模型，隨機分成假手術(shù)組、單純腦出血實驗組，分別按1d、7d、14d、21d分為4個亞組，觀察不同時間點大鼠神經(jīng)功能評分，取腦組織行免疫熒光雙標檢查Nestin與BrdU共表達情況，免疫組化TGF-β表達。對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，觀察腦出血灶周神經(jīng)保護的作用。
　　結(jié)果:第一部份:SFN處理激活Nrf2大鼠組腦出血后與單純腦出血組比較，神經(jīng)功能障礙明顯減輕;與單純腦出血組及比較，SFN處理

4、激活Nrf2大鼠組免疫熒光、western blot檢測Nrf2轉(zhuǎn)錄因子、HO-1抗氧化蛋白表達均升高，于72h達高峰值，SFN處理激活Nrf2大鼠組NF-κB表達下降，免疫組化檢測腦出血小膠質(zhì)細胞活化明顯;RA處理腦出血組大鼠死亡率最高，神經(jīng)功能損傷嚴重，檢測Nrf2轉(zhuǎn)錄因子、HO-1抗氧化蛋白表達均較SFN干預組和單純腦出血組低，持續(xù)性抑制作用可能持續(xù)5天左右，RA處理抑制Nrf2大鼠組NF-莨B表達下降，免疫組化檢測提示腦出血小膠

5、質(zhì)細胞活化明顯且持續(xù)時間至5天。第二部分:本實驗可觀察到:1）單純腦出血組免疫雙標陽性細胞于7d開始有表達，持續(xù)性增多至21d，2）而假手術(shù)組較單純腦出血組在7d、14d、21d免疫雙標陽性細胞少，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。說明腦出血后的確有內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的激活增殖。3）假手術(shù)組TGF-β在細胞質(zhì)中有較少的表達。單純腦出血組TGF-β陽性細胞在1d時無明顯增多，于3d開始增多，可見大量漿著色的陽性細胞，7d達高峰，持續(xù)性增多

6、至21d。說明腦出血后TGF-β的表達與內(nèi)源性神經(jīng)干細胞相關(guān)，可能參與內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的激活增殖。
　　結(jié)論:1）大鼠腦出血后存在急性炎癥損傷;2）萊菔硫烷激活Nrf2-ARE信號通路可提高HO-1、NQO1抗氧化酶表達，減輕腦出血后灶周炎性反應(yīng)，提高神經(jīng)保護作用;3）小膠質(zhì)細胞在腦出血早期活化后具有神經(jīng)毒性作用;4）腦出血后有ENSCs激活、增殖，于7-21天呈逐漸增多的趨勢;5）TGF-β信號通路可能參與腦出血后ENSCs激活