PPARδ激動劑和siRNA對大鼠骨髓基質干細胞及成骨細胞分化和礦化的作用研究.pdf

1、目的：探討過氧化物酶體增殖激活受體(PPAR)δ激動劑GW501516和siRNA對大鼠骨髓基質干細胞(BMSCs)向成脂和成骨方向分化的作用，以及對原代成骨細胞的分化和礦化的作用。以探討PPARδ在骨量調控和骨質疏松發(fā)病機制中的作用，從而為骨質疏松癥的治療提供新的靶點。
　　方法：①選取3W齡雄性SD大鼠，無菌條件下取股骨干骨髓組織，過濾后使用全骨髓細胞貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠原代BMSCs，后采用差速貼壁法純化細胞，通過流式細胞儀檢

2、測其細胞表面標志物(CD29，CD90，CD11b，CD45)來鑒定BMSCs。②將P3代BMSCs隨機分為對照組、PPARδ激動劑組和siRNA干擾組，分別使用成骨誘導液及成脂誘導液進行成骨和成脂方向誘導培養(yǎng)，熒光定量PCR檢測成骨細胞分化標志物（堿性磷酸酶、骨鈣素）和脂肪細胞分化標志物（脂肪酸結合蛋白2、脂連素）mRNA的表達，油紅O染色檢測脂肪細胞分化，茜素紅染色檢測成骨細胞礦化能力。③原代成骨細胞在含有抗壞血酸的α-MEM培養(yǎng)液

3、培養(yǎng)，隨機分為對照組、PPARδ激動劑組和siRNA干擾組，熒光定量PCR檢測成骨細胞分化標志物（ALP和骨鈣素）的表達,茜素紅染色觀察礦化結節(jié)。
　　結果：①BMSCs細胞成梭形，排列呈漩渦狀或瀑布狀，使用流式細胞儀檢測細胞表面標記物，細胞表面高表達CD29、CD90，低表達CD11b、CD45。②與對照組相比，PPARδ激動劑組中BMSCs的成骨細胞方向分化標志物表達增加，BMSCs向脂肪細胞方向分化標志物表達減少。茜素紅染色

4、顯示PPARδ激動劑組細胞礦化結節(jié)較對照組增加，油紅O染色顯示PPARδ激動劑組脂肪小滴明顯減少。siRNA干擾組向成骨細胞方向分化標志物表達減少，向脂肪細胞方向分化標志物表達增加。茜素紅染色顯示siRNA干擾組細胞礦化結節(jié)較對照組減少，油紅染色顯示siRNA干擾組脂肪小滴明顯增加。③原代成骨細胞呈三角形或多邊形，細胞排列呈鋪路石樣改變，PPARδ激動劑組較對照組礦化結節(jié)明顯增多，成骨細胞分化標志物的表達（ALP和骨鈣素）增加。siRN