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文檔簡介
1、目的:通過研究過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)激動(dòng)劑吡咯列酮(pioglitazone,PGZ)對(duì)轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞Smad2/3蛋白及mRNA表達(dá)水平的影響,了解PPARγ激動(dòng)劑對(duì)大鼠成骨細(xì)胞代謝的調(diào)控機(jī)制,以期明確其在骨質(zhì)疏松癥發(fā)生過程中的作用。
方法:取新生24h的SD大鼠乳鼠的顱骨,酶消化法培養(yǎng)獲得成骨細(xì)胞,經(jīng)茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色和堿性磷酸酶染色鑒定為成骨細(xì)胞,MTT法觀察PGZ對(duì)成
2、骨細(xì)胞的增殖影響,AKP活性試劑盒檢測PGZ對(duì)成骨細(xì)胞分化能力的作用,細(xì)胞免疫熒光和Western Blot(蛋白印跡)法分別觀察PGZ對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞Smad2/3、P-Smad3蛋白表達(dá)水平的影響及實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)法檢測對(duì)Smad2/3mRNA的表達(dá)水平。
結(jié)果:PGZ對(duì)成骨細(xì)胞的增殖無明顯影響作用(P>0.05),但能抑制成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶活性(P<0.05);TGF-β1(5ng/ml)干預(yù)
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