蠅蛆組織勻漿液及其酶解物中抑菌組分的研究.pdf

1、本研究體外觀察了蠅蛆組織勻漿液及其酶解液組分對病原性大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和枯草桿菌增殖的影響；結(jié)合動物實驗，探討了勻漿液及其酶解液對動物抗大腸桿菌、沙門氏菌感染的作用；并利用SephadexG-15及RP-HPLC技術(shù)對有效抑菌組分進行了初步的分離與鑒定，為天然抗菌物質(zhì)的開發(fā)提供實驗依據(jù)。 1、蠅蛆組織勻漿液對細菌增殖的影響以及對小鼠的抗感染保護研究以人工培養(yǎng)的新鮮蠅蛆為原料，采用磷酸鹽緩沖液勻漿，觀察勻漿液及其熱

2、滅活液，對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌增殖的影響。結(jié)果表明，蠅蛆組織勻漿液顯著抑制大腸桿菌和沙門氏菌的增殖，而顯著促進金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的增殖。蠅蛆組織勻漿液加熱滅活后抑菌生物活性喪失。根據(jù)體外實驗結(jié)果，探討蠅蛆組織勻漿液在動物體內(nèi)抗大腸桿菌和沙門氏菌感染保護作用，通過體內(nèi)攻菌實驗確定LD<,50>。選用28日齡昆明系清潔級雄性小鼠60只，隨機分為3個處理組(n=20)：正常對照組：基礎(chǔ)日糧+生理鹽水；蠅蛆組織勻漿

3、液熱滅活液組：基礎(chǔ)日糧+蠅蛆組織勻漿液熱滅活液；組織勻漿液組：基礎(chǔ)日糧+組織勻漿液。各處理組灌喂液體積相等，0.3mL/只，連續(xù)灌喂7天后，第8天將E.coli(菌濃為1.80×10<'11>CFU/L)/沙門氏菌(菌濃為2.70×10<'11> CFU/L)分別灌喂組織勻漿液熱滅活液組和組織勻漿液組，0.3mL/只。觀察小鼠發(fā)病及死亡情況直至灌菌后56 h，處死各組小鼠，取盲腸食糜，用平板細菌計數(shù)法測定食糜內(nèi)特定細菌的含量。結(jié)果顯示小

4、鼠灌喂蠅蛆組織勻漿液后，能顯著提高灌喂1.8×10<'11> CFU/L E.coli后小鼠的健康水平(比對照組提高了83.25％)和2.7×10<'11> CFU/L的沙門氏菌后小鼠的健康水平(比對照組提高了42.85％)，并且盲腸食糜內(nèi)特定細菌數(shù)量，實驗組也均顯著低于對照組(p<0.05)。本實驗結(jié)果表明蠅蛆組織勻漿液在體外能抑制大腸桿菌和沙門氏菌的生長，在體內(nèi)能抵御外源性大腸桿菌和沙門氏菌的侵襲感染，預(yù)防胃腸道疾病的發(fā)生。

5、 2、蠅蛆組織勻漿液酶解液對細菌增殖的影響以及對小鼠的抗感染保護研究蠅蛆組織勻漿液分別經(jīng)胰蛋白酶、胃蛋白酶酶解后，觀察其分別對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌四種細菌增殖的影響。結(jié)果表明，胰酶酶解組分對大腸桿菌和沙門氏菌的增殖有顯著的抑制作用，對金黃色葡萄球菌和枯草桿菌有顯著的促進作用；胃蛋白酶酶解組分對四種細菌均起到促進生長的作用。同時胰蛋白酶酶解液加熱滅活后其生物活性沒有發(fā)生顯著性變化。根據(jù)體外實驗結(jié)果，探討蠅蛆組織勻

6、漿液胰蛋白酶酶解液在動物體內(nèi)抗大腸桿菌和沙門氏菌感染保護作用，通過體內(nèi)攻菌實驗確定LD<,50>。選用28日齡昆明系清潔級雄性小鼠50只，隨機分為3個處理組(正常對照組10只，其余兩組各20只)：正常對照組：基礎(chǔ)日糧+生理鹽水；試驗對照組：基礎(chǔ)日糧+生理鹽水；胰酶酶解液組：基礎(chǔ)日糧+胰蛋白酶酶解液。各處理組灌喂液體積相等，0.3mL/只，連續(xù)灌喂7天后，第8天將E.coli(菌濃為3.38×10<'11> CFU/L)/沙門氏菌(菌濃為

7、2.87×10<'11> CFU/L)分別灌喂試驗對照組和酶解液組，0.3mL/只，觀察小鼠發(fā)病及死亡情況直至灌菌后56 h，處死各組小鼠，取盲腸食糜，用平板細菌計數(shù)法測定食糜內(nèi)特定細菌的含量。結(jié)果顯示小鼠灌喂胰酶酶解液后，能顯著提高灌喂3.38×10<'11> CFU/L E.coli、2.87×10M<'11> CFU/L的沙門氏菌后小鼠的健康水平(實驗組分別比對照組提高了25.02％和14.27％)，并且盲腸食糜內(nèi)特定細菌的數(shù)量實

8、驗組也均顯著低于對照組(p<0.05)。本實驗結(jié)果表明胰酶酶解液在體外能抑制大腸桿菌和沙門氏菌的生長，在體內(nèi)能抵御外源性大腸桿菌和沙門氏菌的侵襲感染，預(yù)防胃腸道疾病的發(fā)生。 3、蠅蛆組織勻漿液胰蛋白酶酶解液中抑菌組分的分離蠅蛆組織勻漿液胰蛋白酶酶解液經(jīng)SephadexG-15層析柱后，收集到3個主要吸收峰，觀察不同組分對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌四種細菌的增殖作用。結(jié)果表明，3號峰組分對大腸桿菌和沙門氏菌的增