櫛孔扇貝(Chlamys farreri)性腺發(fā)育相關(guān)基因的篩選及Cf-phb2在精巢中的表達(dá)分析.pdf

1、性腺發(fā)育是發(fā)育生物學(xué)研究的重要領(lǐng)域之一,這是一個(gè)多基因參與調(diào)控的過(guò)程。PHB(Prohibitin)被認(rèn)為參與多種生物過(guò)程,包括抑制某些轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性、對(duì)細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控作用以及抑制腫瘤和細(xì)胞凋亡等。本研究采用半定量RT-PCR技術(shù)對(duì)櫛孔扇貝(Chlamys farreri)增殖期精、卵巢差異表達(dá)譜中的10個(gè)兩性差異表達(dá)序列標(biāo)簽進(jìn)行了驗(yàn)證;RACE技術(shù)獲得phb2全長(zhǎng)cDNA序列,采用半定量RT-PCR、real-time PCR和

2、原位雜交技術(shù)分析了該基因在櫛孔扇貝中的空間表達(dá)以及各發(fā)育階段精巢中的表達(dá)特征。主要結(jié)果如下:
　　半定量RT-PCR檢測(cè),確定櫛孔扇貝10個(gè)兩性差異表達(dá)序列標(biāo)簽中3個(gè)為卵巢高表達(dá),4個(gè)為精巢高表達(dá),一致率為40％。以其中一個(gè)精巢高表達(dá)標(biāo)簽(>F0BWI0G01A0M8X)序列為基礎(chǔ),RACE技術(shù)獲得一個(gè)全長(zhǎng)為2122 bp的cDNA序列,該序列含有開(kāi)放閱讀框882 bp,編碼293個(gè)氨基酸;經(jīng)過(guò)序列比對(duì)及同源性分析初步判定其為櫛孔

3、扇貝phb2基因,定名為Cf-phb2。
　　櫛孔扇貝phb2的半定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,其在各器官中均有表達(dá),以精巢中表達(dá)量最高。實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),Cf-phb2在櫛孔扇貝4個(gè)發(fā)育時(shí)期(休止期、增殖期、生長(zhǎng)期和成熟期)的精巢中均有表達(dá),其表達(dá)量隨著精巢的發(fā)育逐漸增加。其中休止期精巢表達(dá)量最低,成熟期精巢表達(dá)量最高,成熟期精巢的表達(dá)量約是生長(zhǎng)期的3倍,增殖期的15倍。原位雜交檢測(cè)發(fā)現(xiàn),櫛孔扇貝phb2在精巢的各種