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文檔簡介
1、海水貝類具較高的經(jīng)濟價值,其養(yǎng)殖已成為我國海水養(yǎng)殖業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)。近年來,海水養(yǎng)殖貝類大規(guī)模死亡事件頻繁發(fā)生,急需建立穩(wěn)定的貝類細胞培養(yǎng)體系,從細胞和分子水平研究病原體及其致病機理,從而有效檢測、預(yù)防疾病的發(fā)生。細胞培養(yǎng)便于開展細胞工程育種技術(shù),培育出抗逆能力強的新品種,也是解決病害防治的手段之一。貝類種質(zhì)資源豐富,其細胞系的建立將有助于遺傳資源的長期保存。此外,隨著環(huán)境污染的加劇,貝類作為敏感生物的指示作用也日益凸顯。本研究以我國北方沿
2、海重要水產(chǎn)養(yǎng)殖貝類櫛孔扇貝為研究對象,進行細胞培養(yǎng)的研究,旨在建立一套櫛孔扇貝組織細胞體外長期培養(yǎng)方法,為免疫學研究、病原體侵染機制研究、物種保護、遺傳育種、環(huán)境監(jiān)測等搭建平臺,并最終為櫛孔扇貝細胞系的建立構(gòu)建基礎(chǔ)。 櫛孔扇貝心肌組織原代培養(yǎng)單因子條件優(yōu)化結(jié)果顯示,基本培養(yǎng)基L-15能夠最大化促進植塊細胞遷出及較長時間維持細胞體外存活,L-15+M199次之,M199效果較差;5%FBS能夠最大化促進植塊細胞遷出及較長時間維持細
3、胞體外存活,10%FBS次之,15%及20%FBS效果較差。在基本培養(yǎng)基L-15、5-10%FBS培養(yǎng)條件下,細胞平均存活2周左右,部分細胞可維持50d。體外培養(yǎng)的心肌細胞具活躍的收縮現(xiàn)象,細胞單層處可形成肌管及肌絲結(jié)構(gòu)。超微結(jié)構(gòu)顯示培養(yǎng)10 d后的心肌細胞中肌原纖維局部存在,培養(yǎng)更長時間的心肌細胞中肌漿網(wǎng)膨大為若干空泡。隨著培養(yǎng),細胞琥珀酸脫氫酶活性逐漸減弱,而堿性磷酸酶活性相對穩(wěn)定。 以L-15為基本培養(yǎng)基,添加不同濃度的F
4、BS、?;撬帷a2+,正交實驗結(jié)果顯示,5%FBS利于植塊細胞遷出,血清濃度越高,細胞遷出效果越差。5%FBS與各濃度?;撬峤M合可以顯著延長細胞存活時間1-2周;高濃度?;撬?50 mM)效果更加顯著,細胞存活較低濃度?;撬?5mM、20mM)組延長10-30 d左右,部分心肌細胞可以維持正常生長狀態(tài)達60 d以上。20%FBS與各濃度?;撬峤M合的實驗組中,多數(shù)細胞存活2周左右,部分心肌細胞可存活1個月左右,且這些細胞多表現(xiàn)為體積增大
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