甾短桿菌紅色突變株選育及其產(chǎn)膽固醇氧化酶穩(wěn)定條件研究.pdf

1、本實驗以產(chǎn)膽固醇氧化酶(COD)甾短桿菌(Brevibacteriumsp.DGCDC-82)為出發(fā)株，通過超聲波輔助NTG誘變育種，獲得紅色突變株Brevibacteriumsp.DGCCN-25，該突變株產(chǎn)酶能力提高了140％，COD水平達(dá)到1.21U/ml。對菌株DGCCN-25所產(chǎn)的紅色物質(zhì)采用了高效液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用色譜研究，推測其為紅色醇溶性色素，分子量可能為792，目前尚未見相關(guān)研究報道，初步定名為甾桿橘紅色素。

2、優(yōu)化了DGCCN-25產(chǎn)COD發(fā)酵工藝，采用正交實驗分析調(diào)整了產(chǎn)酶培養(yǎng)基及其組成，得出誘變菌株較適宜的產(chǎn)酶條件為：膽固醇添加量從3g/L增加到4g/L、酵母膏從8g/L增加到9g/L，較優(yōu)化培養(yǎng)基前，COD產(chǎn)率提高了24.8％，酶活達(dá)到1.51U/ml。 研究了DGCCN-25產(chǎn)COD的分離純化工藝。粗提取重點解決發(fā)酵液離心后酶活損失過多的問題，通過在發(fā)酵液中添加4.4％(V/V)的異丙醇，離心后COD收率從75％升高到92％。

3、精提取組合SephadexG-25凝膠過濾層析和DEAE-Sephadex離子交換層析相結(jié)合，對粗提取后的酶液進(jìn)一步純化。通過G-25層析，比酶活達(dá)到4.95U/mg，純化倍數(shù)為2.58倍；通過DEAE-Sephadex離子交換層析比酶活達(dá)到13.26U/mg，純化倍數(shù)為2.67倍。進(jìn)一步采用G-25層析處理，比酶活達(dá)到了15.31U/mg，初步達(dá)到了純化目的，總收率為41.3％。 酶穩(wěn)定性研究發(fā)現(xiàn)，提取的粗酶液在4℃條件下存放