瘢痕疙瘩中多配體蛋白聚糖-2表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討多配體蛋白聚糖-2(Syndecan-2簡稱SDC-2)因子在瘢痕疙瘩形成中的可能作用，為利用SDC-2及其相關(guān)因子預(yù)防和治療瘢痕疙瘩提供正確的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 本實(shí)驗(yàn)所收集的標(biāo)本全部取自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院整形外科2006-2007年的手術(shù)患者。 l.免疫組化對照研究共30例，包括瘢痕疙瘩15例，對照正常皮膚15例。所取標(biāo)本患者均無垂體腎上腺疾病、傳染病、皮膚病及免疫性疾病，局部無感染、潰

2、瘍，術(shù)前未應(yīng)用激素及免疫抑制劑治療，局部亦未行放射治療。 2.取下標(biāo)本立即置入10％中性甲醛液固定。經(jīng)脫水、石蠟包埋、切片，采用Elivision兩步法對標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，在400倍光鏡下觀察切片中SDC-2的表達(dá)和分布情況，PBS替代做陰性對照，每張切片選取6個(gè)高倍視野。陽性率比較采用x2檢驗(yàn)，以明確SDC-2在上述兩種不同組織間是否存在差異表達(dá)(檢驗(yàn)水準(zhǔn)取0.05)。 3.在2006年的手術(shù)病人中選擇瘢痕疙瘩和正

3、常皮膚標(biāo)本各6例。 4.按文獻(xiàn)方法進(jìn)行真皮成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)，待細(xì)胞融合后傳代。 5.經(jīng)過5～6代細(xì)胞生長，待培養(yǎng)細(xì)胞量占培養(yǎng)瓶底面80％左右時(shí)換液。48小時(shí)后將細(xì)胞消化、離心，抽提RNA并反轉(zhuǎn)錄cDNA，行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測。 6.重復(fù)3次后，得到的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以明確上述兩種組織來源的成纖維細(xì)胞中SDC-2基因是否存在差異表達(dá)(檢驗(yàn)水準(zhǔn)取0.05)。 結(jié)果： 1.正常皮膚、瘢痕疙瘩組

4、織中SDC-2表達(dá)的免疫組化比較在400倍光鏡下觀察， SDC-2因子在兩種組織的表皮及真皮中均有陽性表達(dá)，為黃或棕黃色顆粒，呈局灶性或彌漫性分布，主要定位于上皮細(xì)胞基底層和細(xì)胞間間隙，在毛囊上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞也可見陽性染色。在大部分瘢痕疙瘩中呈陽性至強(qiáng)陽性表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，SDC-2在瘢痕疙瘩中陽性率為86.67％，在正常皮膚為40.00％。SDC-2在瘢痕疙瘩中的表達(dá)陽性率高于正常皮膚，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

5、 2.正常皮膚、瘢痕疙瘩來源的成纖維細(xì)胞中SDC-2轉(zhuǎn)錄表達(dá)的比較將瘢痕疙瘩和正常皮膚來源的成纖維細(xì)胞中SDC-2基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平作為配對資料，兩樣本均數(shù)用t檢驗(yàn)分析，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：瘢痕疙瘩來源的成纖維細(xì)胞中SDC-2基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平遠(yuǎn)大于正常皮膚來源的成纖維細(xì)胞中SDC-2基因的表達(dá)水平(P＜0.05)。 結(jié)論：SDC-2是瘢痕疙瘩形成過程中的重要促進(jìn)因子，其高表達(dá)和瘢痕疙瘩、腫瘤等相關(guān)疾病的形成有密切聯(lián)系，