促產(chǎn)蛋核酸制劑的改造及對其安全性初步評價.pdf

1、核酸制劑作為一種新興的生物制品，在感染性疾病、遺傳病和腫瘤等疾病的預防和治療以及促進動物生長繁殖方面具有很大潛力。根據(jù)國際規(guī)定的標準，核酸制劑大規(guī)模生產(chǎn)使用以前首先需要對其進行嚴格的安全性評價。其中制劑與宿主染色體DNA是否會發(fā)生整合成為一個公眾和研究者最為關注的問題。
　　本實驗室在早期的研究工作中開發(fā)了一種可以有效改善絲毛烏骨雞產(chǎn)蛋性能的核酸制劑，我們應用Qiagen公司生產(chǎn)的質粒中提試劑盒大量制備注射用核酸制劑，通過建立一整

2、套安全性評價方案，并按照方案設計的周期采樣，通過試劑盒提取注射過該核酸制劑的洛島紅雞的各個相關組織的基因組，包括肌肉（注射組織）、腸道、卵巢、肝臟、胃、心臟、輸卵管、脾臟、腎臟等九個組織，每次采樣三只雞即三個重復，采樣時間分別為0天、3天、7天，以后每隔一周定期采樣。并設計相應引物進行PCR擴增，檢測核酸制劑在不同組織中持續(xù)存在的時間。對該制劑的安全性進行的初步分析表明該制劑在洛島紅蛋雞體內最長有效發(fā)揮作用的時間大約為21天。顯然時間較

3、短，為此，本研究在原制劑的基礎上對其進行改造，添加了SV40大T抗原表達結構和SV40復制起始位點，通過這一改造使其有效發(fā)揮作用的時間延長到了49天，這大大延長了其有效發(fā)揮作用的時間。
　　與此同時，本研究還通過PCR檢測的方法對該制劑在不同組織中分布及持續(xù)存在時間進行的了檢測，初步對其安全性進行了分析得到如下結果:在肌肉組織中該核酸制劑可持續(xù)存在到49天，56天時已完全檢測不到;對于有食用價值的雞心、雞肝、雞胃等器官組織在注射后

4、第三天時可以檢測到微量存在，在第七天時已完全檢測不到，說明這些組織在7天后均安全可食用;而對于繁殖器官輸卵管和卵巢，則在實驗第零天即檢測不到其存在，可以推測雞蛋是始終可以食用的。當然這些只是對該制劑的安全性進行的初步評價，在其大規(guī)模使用之前還需進行更為深入的安全性評價。
　　總之，本項目開發(fā)的促產(chǎn)蛋核酸制劑，雖然還有許多的工作有待進一步開展，但具有良好的開發(fā)潛力，因此建議進一步增加投入開展深入細致的研究工作，為該產(chǎn)品早日上市并服務