梓葛凍干粉針的研制及其初步安全性評(píng)價(jià).pdf

1、梓葛凍干粉針為本實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)的用于防治缺血性腦血管疾病的一種新型中藥單體復(fù)方制劑,具有獨(dú)創(chuàng)性,可獲得自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)。本課題受到教育部項(xiàng)目(XDJK2009C084、XDJK2010C059)科研基金的支持。
　　 目的:
　　 按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局《藥品注冊(cè)管理辦法》相關(guān)要求,研制梓葛凍干粉針,確定其的處方、制備工藝,制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并考察其穩(wěn)定性及初步安全性。
　　 方法:
　　 1.梓葛凍干粉針

2、的處方篩選:選用磺丁基-β-環(huán)糊精作為葛根素的增溶劑,制作磺丁基-β-環(huán)糊精對(duì)葛根素的增溶曲線,應(yīng)用梯度濃度法確定磺丁基-β-環(huán)糊精和葛根素的投料比;采用分組評(píng)分法考察含不同質(zhì)量濃度的葡萄糖、乳糖、甘露醇和空白的梓葛凍干粉針的外觀性狀和水分含量,從而選擇合適的填充劑,確定梓葛凍干粉針的處方。
　　 2.梓葛凍干粉針的制備工藝研究:采用時(shí)間評(píng)分法考察不同的投料順序和加熱條件對(duì)葛根素溶解速度的影響,確定梓葛凍干粉針的制備過(guò)程:采用分

3、組評(píng)分法考察不同預(yù)凍溫度與時(shí)間、升華干燥溫度與時(shí)間和解析干燥溫度與時(shí)間對(duì)梓葛凍干粉針的影響,確定梓葛凍干粉針的凍干工藝。
　　 3.梓葛凍干粉針質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究:采用反向高效液相色譜法(RP-HPLC),建立藥物含量及有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法;考察梓葛凍干粉針產(chǎn)品含量、有關(guān)物質(zhì)、水分、pH值等變化,對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制,建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　 4.梓葛凍干粉針的穩(wěn)定性考察:對(duì)放大實(shí)驗(yàn)生產(chǎn)的三批梓葛凍干粉針進(jìn)行影響因素實(shí)驗(yàn)、加速實(shí)驗(yàn)和長(zhǎng)

4、期實(shí)驗(yàn),考察其穩(wěn)定性。
　　 5.梓葛凍干粉針的初步安全性考察:安全性考察分為過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)、溶血性實(shí)驗(yàn)、刺激性實(shí)驗(yàn)、急性毒性實(shí)驗(yàn)和一般藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)。(1)過(guò)敏性實(shí)驗(yàn):觀察攻擊給藥后豚鼠是否出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)并判定過(guò)敏反應(yīng)程度為全身主動(dòng)過(guò)敏實(shí)驗(yàn);觀察攻擊給藥后SD大鼠皮膚是否出現(xiàn)藍(lán)斑并記錄藍(lán)斑直徑為皮膚被動(dòng)過(guò)敏實(shí)驗(yàn)。(2)溶血性實(shí)驗(yàn):觀察擬用臨床濃度梓葛凍干粉針是否導(dǎo)致2%兔紅細(xì)胞懸液出現(xiàn)溶血和凝聚反應(yīng)。(3)刺激性實(shí)驗(yàn):觀察用藥側(cè)兔耳血管

5、和肌肉組織的病理切片是否出現(xiàn)病變和壞死,并與對(duì)照側(cè)比較。(4)急性毒性實(shí)驗(yàn):觀察和記錄不同濃度梓葛凍干粉針給藥后KM小鼠的反應(yīng)和死亡情況。(5)比較梓葛凍干粉針給藥后對(duì)動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的影響,并與生理鹽水對(duì)照組比較。
　　 結(jié)果:
　　 1.梓葛凍干粉針的處方:磺丁基-β-環(huán)糊精是葛根素的良好增溶劑,增溶曲線線性關(guān)系良好(r=0.9997);磺丁基-β-環(huán)糊精和葛根素的投料質(zhì)量比確定;梓葛凍干粉針最佳

6、處方為葛根素Xmg、梓醇Ymg和磺丁基-β-環(huán)糊精Zmg,制成2mL凍干原液。
　　 2.梓葛凍干粉針的制各工藝:(1)凍干原液的制備;按最佳處方稱取各組分,確定投料順序,加熱加速葛根素溶解:(2)產(chǎn)品的凍干工藝:①預(yù)凍:確定預(yù)凍溫度和時(shí)間;②升華干燥:確定真空度和時(shí)間,自然升溫至室溫;③解析干燥:確定真空度,升溫,保溫時(shí)間。
　　 3.梓葛凍干粉針質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):(1)含量及有關(guān)物質(zhì):采用RP-HPLC法,流動(dòng)相為水-乙腈,

7、梯度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm,葛根素和梓醇均在5～200mg/L濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r=0.9999);相對(duì)含量控制范圍為90%～110%;有關(guān)物質(zhì)控制＜2%;(2)水分控制在＜3%;(3)pH值控制在4.5～6.5。
　　 4.梓葛凍干粉針的穩(wěn)定性:梓葛凍干粉針的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,影響因素實(shí)驗(yàn)的高溫條件(60℃)對(duì)梓葛凍干粉針的影響強(qiáng)于高濕度(90%)和強(qiáng)光條件(4500Lx),加速實(shí)驗(yàn)6個(gè)月和長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)9個(gè)月的結(jié)

8、果均顯示梓葛凍干粉針的含量、有關(guān)物質(zhì)、水分、pH值等相對(duì)穩(wěn)定。
　　 5.梓葛凍干粉針的初步安全性:(1)過(guò)敏性實(shí)驗(yàn):梓葛凍干粉針28.4mg/kg和85.3mg/kg劑量組豚鼠均未出現(xiàn)全身主動(dòng)過(guò)敏反應(yīng):梓葛凍干粉針32.7mg/kg和98.1mg/kg劑量組SD大鼠均未出現(xiàn)明顯皮膚過(guò)敏反應(yīng)。(2)溶血性實(shí)驗(yàn):1mg/mL擬用臨床濃度的梓葛凍干粉針管均未出現(xiàn)溶血和紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象。(3)刺激性實(shí)驗(yàn):17.0mg/kg和51.0mg

9、/kg梓葛凍干粉針用藥側(cè)兔耳血管和肌肉組織均未見明顯病變、壞死現(xiàn)象。(4)急性毒性實(shí)驗(yàn):梓葛凍干粉針對(duì)KM小鼠的LD50為1562.4mg/kg。(5)一般藥理學(xué)實(shí)驗(yàn):梓葛凍干粉針52.3mg/kg、104.6mg/kg、209.2mg/kg劑量對(duì)KM小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)未見明顯影響(P＞0.05):梓葛凍干粉針32.7mg/kg、65.4mg/kg、130.8mg/kg劑量對(duì)SD大鼠的心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)未見明顯影響(P＞0.05)。<